Гель, содержащий формалин в концентрации 10%, не обладает местнораздражающим, аллергизирующим и иммунотоксическим действием, не оказывает влияния на течение химического канцерогенеза, не обладает эмбриотоксическими и тератогенными свойствами, не влияет на репродуктивные органы и развитие потомства экспериментальных животных. Слабо выраженная подострая токсичность геля, содержащего 20% формалина, проявляется при достижении суммарной дозы субстанции 60 г/кг.

Острая и подострая токсичность

Острую токсичность действующей субстанции препарата - 40% водного раствора формальдегида исследовали на половозрелых мышах-самцах F1(C57Bl/6хCBA) массой 18-20 г при однократном внутрибрюшинном введении от 0,1 мл до 2,0 мл раствора. Эффект оценивали по 10-суточной выживаемости животных на основе определения максимально переносимой дозы и LD50 методом Литчфилда и Уилкоксона. Установлено, что LD50 для изученного вещества составляет 879 мг/кг, LD16 - 448 мг/кг и LD84 - 1363 мг/кг.

Подострую токсичность препарата изучали на взрослых половозрелых крысах Wistar обоего пола массой 200-220 г, которым на лишенную волосяного покрова кожу спины (1х1см) ежедневно наносили по 1 г геля, содержащего формалин в концентрации 10, 15 и 20%. В течение 15 дней ежедневных аппликаций, т.е. по достижении соответствующих суммарных доз формальдегида 7,5; 11,25 и 15,0 г/кг массы, гибели крыс не отмечалось ни в одной из групп, что свидетельствует об отсутствии признаков острой и подострой токсичности препарата в изученных концентрациях у данного вида животных.

Учитывая низкую токсичность препарата, выявленную в исследовании на крысах, дальнейшие эксперименты были проведены на мышах, что помимо использования фактора видовых различий в реактивности животных позволило существенно повысить дозировку препарата в расчете на 1 кг массы тела. Половозрелым мышам-самцам F1(C57Bl/6хCBA) массой 18-20 г на предварительно выстриженную кожу боковой поверхности спины (0,5x0,5 см) наносили по 0,5 г геля, содержащего формалин в концентрации 10 и 20%. Разовая ежедневная дозировка формальдегида в пересчете на 1 кг массы животного составила для различных концентраций препарата, соответственно: 2,5 и 5 г/кг.

Через сутки после первой аппликации гибели животных не наблюдалось. Дальнейшие ежедневные нанесения препарата привели к гибели 40% мышей после 12 аппликации геля в концентрации 20%, что соответствует суммарной полученной дозе формальдегида 60 г/кг. При концентрации препарата 10% гибели животных в остром и подостром эксперименте не отмечалось.

При гистологическом исследовании образцов кожи, взятых из места нанесения препарата, выявлено утолщение рогового слоя, увеличение средних размеров кератиноцитов и умеренное повышение толщины эпидермального пласта. Со стороны дермы никаких изменений, свидетельствующих о токсическом действии препаратов, выявлено не было; воспаления, инфильтрации, дезорганизации межклеточного вещества или волокон не обнаружено. Таким образом, острая токсичность раствора формальдегида как субстанции составляет для мышей по LD50 879 мг/кг. Гель с формальдегидом при местном применении не обладает острым токсическим действием у лабораторных грызунов (крысы, мыши). В концентрации 20% гель с формальдегидом проявляет в эксперименте, выполненном на мышах, слабо выраженную подострую токсичность, проявляющуюся по достижении суммарной дозы 60 г/кг.

Местнораздражающее и аллергизирующее действие

Местнораздражающее и аллергизирующее действие гелей, содержащих формалин в различных концентрациях, исследовали на белых беспородных морских свинках-самках массой 300-350 г в модели накожных аппликаций. Гели наносили на выстриженный участок кожи размером 2х2 см ежедневно в течение 10 дней. Местнораздражающее действие оценивали по шкале парных баллов по выраженности эритемы и отека в месте тестирования (таблица 1). Для оценки аллергизирующих свойств гелей после 10-й аппликации на противоположном боку выстригали участок размером 2х2 см и наносили разрешающую дозу препарата.

Примечание: в числителе указано наличие эритемы, в знаменателе - отека.

В первые 4 дня опыта признаков местнораздражающего действия препарата не наблюдалось. На 5-й день опыта гели, содержащие 15% и 20% формалина, вызывали эритему и отек кожи в месте нанесения препарата. Следовательно, гель с формалином при ежедневном нанесении в течение 5 дней проявляет местнораздражающее действие у подопытных морских свинок, начиная с концентрации 15%. Вместе с тем, у всех животных отмечалась отрицательная реакция на разрешающую дозу препарата. Следовательно, гель с формалином в указанных концентрациях не вызывает сенсибилизации морских свинок.

Иммунотоксические свойства

У взрослых половозрелых мышей-самцов F1(C57Bl/6хCBA) массой 18-2О г исследовали процентное содержание Т- и В-лимфоцитов в популяции селезеночных клеток методом иммунофлюоресценции и функциональное состояние нейтрофильных лейкоцитов по активности кислородного метаболизма в тесте спонтанной хемилюминесценции и при фагоцитозе зимозана. Животным на предварительно выстриженную кожу спины (участок приблизительно О,5хО,5 см22) 1- , 3- и 5-кратно наносили гель в концентрации 1О, 15 или 2О % (по раствору формальдегида).

Испытание возможной канцерогенной активности

Исследование проводили на взрослых половозрелых мышах-самцах F1 (C57Bl/6хCBA) массой 18-2О г. В качестве канцерогена использовали 9,10- диметилбензантрацен (ДМБА), который наносили в виде ацетонового раствора на межлопаточную область спины 1 раз в неделю по 200 мкг на животное в течение 5 недель. После этого введение канцерогена прекращали, и животных наблюдали в течение 1 ме-сяца. Гель, содержащий 10% формалина, наносили на ту же область кожи ежедневно на протяжении всего опыта. В конце опыта учитывали количество образовавшихся папиллом (таблица 4) и проводили гистологическую верификацию результатов.

Из приведенных данных следует, что гель, содержащий формалин, не обладает самостоятельным канцерогенным эффектом. Будучи примененным совместно с канцерогеном, гель с формалином не оказывает влияния на химический канцерогенез.

Эмбриотоксические и тератогенные свойства

Исследование ростостимулирующих свойств геля, содержащего раствор формальдегида, проводили путем оценки способности препарата изменять массу плодов, новорожденных и взрослых крыс Wistar. Препарат (10%, по 1,0 г) наносили ежедневно на кожу предварительно выстриженной поверхности межлопаточной области спины. Установлено, что нанесение геля беременным самкам крыс Wistar не вызывает достоверных изменений массы эмбрионов и не влияет на рост новорожденных крысят. Препарат не влияет также на массу взрослых крыс Wistar при его ежедневном местном применении в течение 30 дней.

Исследование эмбриотоксических и тератогенных свойств геля выполнены на взрослых, половозрелых, ранее не беременевших крысах Wistar массой 240 ± 20 г. Самцов подпускали к самкам в стадии проэструса. Первым днем беременности считали день обнаружения сперматозоидов во влагалищных мазках. Гель наносили на выстриженную поверхность межлопаточной области спины крыс ежедневно в течение 19 дней беременности. На 20-й день беременности крыс умерщвляли смесью эфира с хлорформом. Результаты оценивали по предимплантационной и постимплантационной смертности плодов, путем подсчета количества желтых тел в яичнике, числа мест имплантации и живых плодов в матке. Полученные результаты позволяют сделать вывод, что препарат при ежедневном местном применении у беременных крыс не проявляет эмбриотоксических свойств, что выражается в отсутствии изменений показателей пред- и постимплантационной смертности.

Тератогенные свойства геля оценивали по результатам патоморфологического исследования внутренних органов и опорно - двигательного аппарата плодов на наличие врожденных визуально различимых аномалий. Для исследования опорно-двигательного аппарата использовали окраску костной и хрящевой ткани ализариновым красным. Врожденных аномалий внутренних органов и скелета плодов при местном нанесении геля обнаружено не было, что свидетельствует об отсутствии у препарата тератогенных свойств.

Влияние на развитие потомства исследовали на беременных крысах Wistar (две группы по 20 животных). Первая группа ( интактные) служила контролем, вторая - ежедневно в течение всего срока беременности получала накожные аппликации препарата. На 7-й, 14-й и 20-й дни беременности регистрировали массу животных. Развитие потомства оценивали по нарастанию массы тела крысят, развитию рефлексов, двигательной активности. Установлено, что втечение беременности и базовые показатели развития потомства у крыс, получавших гель, не отличаются от контроля.

Исследование влияния на яичники и семенники проводили на половозрелых крысах Wistar обоего пола массой 140-150 г. Контролем служили интактные животные. Крысы экспериментальных групп в течение 50 дней получали ежедневно местно по 0,5 г 10% геля. Животных умерщвляли хлороформом, гонады фиксировали и заливали в парафин. На основании обзорного макро- и микроскопического исследования семенников и яичников крыс, получавших гель, установлено, что изученный препарат не оказывает повреждающего действия на половые железы животных.

Исследование влияния на репродуктивную функцию проводили на крысах Wistar обоего пола весом 220-240 г. 10% гель наносили местно на кожу межлопаточной области спины по 0,5 г самцам - в течение 65 дней до спаривания с интактными самками, самкам - в течение 14 дней до спаривания с интактными самцами. Длительность эстрального цикла у крыс, получавших препарат, не претерпевала существенных изменений. Наблюдение за беременными животными не выявило отклонений в экспериментальной группе по сравнению с контролем. На 17-19 дни половину всех беременных самок умерщвляли и подсчитывали количество желтых тел в яичниках, мест имплантации в матке, количество живых и мертвых плодов. На основании этих данных вычисляли уровень пред- и постимплантационной смертности. Индекс плодовитости высчитывали как процентное отношение числа оплодотворенных самок к общему количеству самок, содержавшихся с самцами. Способность к вынашиванию беременности оценивали по индексу беременности, т.е. по отношению числа беременных самок к количеству оплодотворенных животных. Полученные данные позволяют заключить, что гель с формалином при накожном нанесении не влияет на репродуктивную функцию крыс Wistar.

Таким образом, гель с формалином не обладает эмбриотоксическим и тератогенным действием, равно как и повреждающими эффектами на репродуктивные органы и развитие потомства у экспериментальных животных.

проф. Альбанова В.И.