Подвижность особей и акарограмма как критерии оценки действия препаратов против клещей рода Demodex

К.Н. Пустовая¹, Г.А. Пьявченко^1,2, М.В. Арисов³, В.И. Ноздрин¹

¹ – АО «Фармацевтическое научно-производственное предприятие «Ретиноиды»», г. Балашиха, Московская область, Россия;
² – ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздрава России (Сеченовский университет), Москва, Россия;
³ – Всероссийский научно-исследовательский институт фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений — филиал ФГБНУ «Федеральный научный центр — Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко» Российской академии наук, Москва, Россия

Резюме

Цель исследования: изучить возможность использования методов оценки подвижности и акарограммы клещей рода Demodex у человека в качестве критериев эффективности действия потенциальных акарицидных препаратов.

Материал и методы. Исследование проводили на материалах соскоба сально-волосяных комплексов кожи крыльев носа у 10 клинически здоровых мужчин-добровольцев (1-я группа наблюдения). Соскоб помещали на предметное стекло в каплю раствора глицерина, после чего вплотную окружали исследуемыми препаратами (10% серная, 5% цинковая, 5% салициловая, 5% дегтярная или 2% скипидарная мази, 1% крем ивермектина) или не оказывали воздействия. О гибели клещей судили по прекращению подвижности и структурным изменениям тела под световым микроскопом. Во 2-ю группу наблюдения входили 35 пациентов (мужчин и женщин) с клиническими диагнозами «угревая болезнь», «розацеа», «себорейный дерматит» и «периоральный дерматит», у которых в соскобах под микроскопом выявили живых, подвижных клещей рода Demodex на разных стадиях развития. Пациенты получали местно один из указанных лекарственных препаратов. Подвижность клещей и акарограмму оценивали на 1-й, 15-й и 30-й дни наблюдения.

Заключение. Изучение подвижности и акарограммы клещей рода Demodex является эффективным способом оценки наличия акарицидного действия у веществ.

Ключевые слова: Demodex folliculorum, акарицидное действие, акарограмма, подвижность клещей

Среди всего многообразия клещей рода Demodex у человека обнаружены три вида паразитов: D. folliculorum, D. brevis и D. сanis, которые обитают в волосяных фолликулах и сальных железах [1, 2]. Клиника демодекоза часто сопровождается другими заболеваниями кожи, такими как угревая болезнь, розацеа, периоральный и себорейный дерматиты [3, 4]. Однако простые и доступные методы лабораторной диагностики, а также критерии оценки эффективности проводимой терапии в отечественной литературе еще не получили достаточного освещения [5].

Цикл развития клеща рода Demodex составляет 15—25 дней и включает в себя яйцо, личинку, протонимфу, дейтонимфу и имаго [6]. Яйца клещей бывают веретенообразной, овальной или ромбовидной формы и имеют размеры от 58×19 мкм. Через 2—3 дня из яиц появляются подвижные личинки размерами 0,08×0,035 мм, которые характеризуются отсутствием полового диморфизма и тремя парами конечностей. Через 1,5—2 сут личинка превращается в протонимфу (размерами от 0,12×0,029 мм), которая также имеет три пары конечностей и способна к активному питанию. Через 3—4 дня протонимфа переходит в дейтонимфу. Ее размеры (0,2—0,3 мм) приближаются к размерам взрослой особи, и у нее появляется четвертая пара конечностей. Еще через 1—2 дня происходит окончательная трансформация дейтонимфы в имаго, а также возникает половой диморфизм. После спаривания самцы погибают, а самки могут откладывать сотни яиц [7].

Целью настоящего исследования стало изучение возможности использования методов оценки подвижности и акарограммы клещей рода Demodex в качестве критериев эффективности действия потенциальных акарицидных препаратов у человека.

Материал и методы

Исследование выполнено в Научном дерматологическом центре АО «Ретиноиды» (лицензия №ЛО-77-01-016614) на двух группах пациентов-добровольцев. В 1-ю группу входили 10 клинически здоровых мужчин в возрасте 26—75 лет, которые перед исследованием не пользовались средствами для ухода за кожей лица в течение 2 сут. Исследование проводили на соскобах сально-волосяных комплексов с поверхности кожи крыльев носа. Материал помещали в каплю 50% водного раствора глицерина и отбирали по пять подвижных особей клещей в каждую группу для воздействия исследуемыми препаратами (10% серная, 5% цинковая, 5% салициловая, 5% дегтярная или 2% скипидарная мази, 1% крем ивермектина) или не оказывали воздействия. Жизнеспособность клещей оценивали каждые полчаса под световым микроскопом по подвижности ротового аппарата, конечностей и активному перемещению клещей в материале (рис. 1).

Рис. 1. Микрофотография подвижных частей тела клеща D. folliculorum. Неокрашенный препарат in vitro. Различимы колющесосущий ротовой аппарат, конечности, тело целиком (гнатосома, подосома, опистосома).

Исследуемые препараты были получены по рецептурной прописи из производственной аптеки («КИТФАРМА», г. Балашиха, лицензия №ЛО-50-02-006032).

У 2-й группы пациентов с клинически подтвержденными диагнозами «угревая болезнь», «розацеа», «себорейный дерматит» и «периоральный дерматит» (35 пациентов в возрасте 19—50 лет) собрали материал соскобов кожи из очагов поражения, так же как и у мужчин-добровольцев 1-й группы. Эти пациенты получали в течение 30 дней 1 раз в сутки на ночь одну из вышеупомянутых мазей, полученных из тех же источников. На 1-й, 15-й и 30-й дни наблюдения в соскобах кожи определяли подвижность клещей, как описано ранее, и подсчитывали акарограмму. При этом определяли клещей на стадиях яйца, личинки, протонимфы, дейтонимфы и имаго. Присутствие клещей отмечали знаком «+», уменьшение количества особей в 2 раза и более по отношению к числу особей из предыдущего забора материала — знаком «±», отсутствие — знаком «‒». Все обследуемые пациенты давали письменное информированное согласие на обследование, наблюдение и лечение.

Результаты и обсуждение

Клещи рода Demodex в условиях in vitro прекращают свое движение и гибнут в течение 2—8 ч (рис. 2, 3). Наиболее эффективным акарицидным действием обладают 2% скипидарная и 5% дегтярная мази, которые в этом отношении сопоставимы с 1% кремом ивермектина.

При ежедневном одноразовом накожном нанесении этих композиций двигательная активность клещей прекращается начиная с 15-го дня применения (табл. 1).

Таблица. 1. Подвижность клещей рода Demodex, полученных от пациентов с угревой болезнью, розацеа, себорейным и периоральным дерматитами, использовавших акарицидные препараты (n≥5 особей от каждого пациента)

Примечание. #1–5 — пациент №№1, 2, 3, 4, 5 соответственно (в каждой из семи групп исследования, n=35); «+» — слабая подвижность; «++» — средняя подвижность; «+++» — сильная подвижность.

Подсчет акарограммы показывает, что клещи на разных стадиях развития перестают обнаруживаться после 15-го дня и почти полностью исчезают в соскобах после 30-го дня применения 5% дегтярной и 2% скипидарной мазей. Той же степенью выраженности эффекта обладает и 1% крем ивермектина (табл. 2).

Таблица. 2. Результаты исследования акарограммы клещей рода Demodex, полученных от пациентов c угревой болезнью, розацеа, себорейным и периоральным дерматитами, использовавших акарицидные препараты (n≥5 особей от каждого пациента)

Примечание. *1 – яйцо; *2 – личинка; *3 – протонимфа; *4 – дейтонимфа; *5 – имаго; «+» — наличие клещей в материале соскоба (n≥5); «±» — уменьшение количества особей в 2 раза и более; «‒» — отсутствие особей.

Полученные данные подтверждают, что методы оценки подвижности клещей рода Demodex и анализа их развития в сравнении с дерматоскопией, оптической когерентной томографией и конфокальной лазерной сканирующей микроскопией не требуют специального оборудования и могут быть широко доступны [1]. На рис. 4 представлены фотографии клещей рода Demodex на разных стадиях жизненного цикла.

О необходимости исследований для оценки эффективности терапии пишут в своей монографии Т.В. Соколова и соавт. [8]. В данной работе показана целесообразность акарограммы и оценки жизнедеятельности паразитов с помощью критерия подвижности.

Рис. 2. Продолжительность подвижности клещей рода Demodex, находившихся в окружении мазей in vitro, в часах, M±SE (n≥5, p≤0,05).

Рис. 3. Микрофотография клещей рода Demodex в условиях in vitro через 2 дня после применения 1% крема ивермектина.

Рис. 4. Микрофотографии стадий развития клеща рода Demodex (слева направо): яйцо, личинка, протонимфа, дейтонимфа, имаго.

Заключение

Предложенные методы изучения подвижности и акарограмма клещей рода Demodex у человека являются простыми, доступными и эффективными способами оценки акарицидного действия препаратов.

Конфликт интересов между авторами отсутствует.

Литература

Щеткина М.В. Клинические особенности, диагностика и лечение демодекоза кожи. Здравоохранение Дальнего Востока. 2018;1:99-102.
Пустовая К.Н. Случай обнаружения Demodex canis в практике врача-дерматолога. Альманах «Ретиноиды». 2019;35:39.
Сирмайс Н.С., Абесадзе Г.А., Устинов М.В. Демодекоз: патогенетические аспекты при различных дерматозах лица. М. 2013:26.
Бутов Ю.С., Акилов О.Е. Клинические особенности и вопросы классификации демодикоза кожи. Рос журн кожн вен бол. 2003;2:53-58.
Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Под ред. Миронова А.Н. В двух частях. М.: 2012.
Адаскевич В.П. Демодекоз: этиология, патогенез, клинические формы, диагностика, лечение. Дерматовенерол. Косметол. 2015;1(01):60-71.
Инструкция по диагностике, лечению и профилактике демодекоза. Минск; 2001:18.
Соколова Т.В., Федоровская Р.Ф., Ланге А.Б. Чесотка. М. 1989:152-156.