К.Н. ПУСТОВАЯ1, Г.А. ПЬЯВЧЕНКО1,2, В.И. НОЗДРИН1
1 – АО «Фармацевтическое научно-производственное предприятие «Ретиноиды», Балашиха, Московская область, Россия;
2 – ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» (Сеченовский университет) Минздрава России, Москва, Россия;
Актуальность исследования обусловлена планированием выделения в МКБ-11 в самостоятельное заболевание демодекоз и, вследствие этого, разработкой новых лекарственных препаратов для его лечения.
Цель исследования — изучение in vitro акарицидного эффекта препарата Д-18 (АО «Ретиноиды», Россия) в отношении клещей Demodex canis и Demodex folliculorum, выявленных у человека.
Материал и методы. Выделенных клещей на предметном стекле помещали в раствор глицерина и вплотную окружали препаратом Д-18, его мазевой основой и препаратом, содержащим ивермектин 1%. Под световым микроскопом наблюдали двигательную активность клещей до момента гибели, которую констатировали по отсутствию признаков движения.
Заключение. Препарат Д-18 обладал в большей степени выраженным акарицидным эффектом в отношении клещей вида Demodex canis в исследовании in vitro, чем препарат, содержащий ивермектин 1%. В отношении клещей Demodex folliculorum оба препарата обладали в равной степени выраженным акарицидным эффектом.
Ключевые слова: Demodex, акарицидный препарат, ивермектин.
Демодекоз – распространённое хроническое паразитарное заболевание, вызываемое клещами рода Demodex, поражающее людей и животных. Этот дерматоз занимает 7 место по частоте заболеваемости и составляет 2 – 5% всех кожных патологий. Известно более 65 видов клещей, однако до недавнего времени считали, что на коже человека обитают всего 2 из них: D. folliculorum и D. brevis. В настоящее время появляется информация об обнаружении также особей Demodex canis у человека [1, 2, 3].
Демодекоз собак является распространённым заболеванием, вызываемым железничными клещами вида Demodex canis. В большинстве случаев заболевание возникает у животных в возрасте до 1,5 лет. Важную роль в его патогенезе играют предрасполагающие факторы, такие как ненадлежащие условия содержания, наличие короткой шерсти, эндопаразитов, хронических заболеваний и др. Паразит имеет удлинённое тело сигаровидной формы с четырьмя парами располагающихся в передней части туловища коротких конечностей, поперечно-исчерченную светло-серую кутикулу. Самцы имеют размер – 0,22–0,25 мм, самки – 0,24–0,30 мм. Цикл развития клеща продолжается 20–35 дней и имеет 5 стадий: яйцо – личинка – протонимфа – дейтонимфа – имаго. Клещи обитают в сальных железах и волосяных фолликулах, вызывая атрофию клеток прикорневого влагалища, питаясь остатками эпителиальных клеток [4, 5]. Демодекоз собак является потенциально опасным для жизни животного системным заболеванием и классифицируется как локализованный (наличие пяти или менее очагов поражений) или генерализованный (шесть или более очагов поражения). Процесс диагностики заболевания не представляет сложности: проводят несколько глубоких соскобов кожи до появления капиллярного кровотечения, затем делают акарограмму с подсчётом количества яиц, личинок, нимф и имаго. Повышенное внимание уделяют локализации паразитов на морде и лапах, поскольку это самые распространённые участки обитания клещей. Наиболее благоприятный прогноз лечения характерен для локализованной формы, а при менее благоприятной, генерализованной, – проводится комбинированная терапия [6], включающая как местное акарицидное лечение, так и системную антибиотикотерапию (при наличии присоединения бактериальной инфекции).
Клещи вида Demodex folliculorum являются сапрофитами кожи человека, однако при определённых факторах (нарушение иммунорезистентности, проницаемости гистогематических барьеров, обострение хронических заболеваний, неблагоприятные внешние факторы) они могут переходить в паразитарную форму. Морфология этого вида широко изучена. Самки имеют длину около 0,40 мм, самцы 0,16 мм, тело покрыто хитиновой оболочкой. Кутикула клеща состоит из трех оболочек: внешней – эпикутикулы, средней – экзокутикулы и внутренней – эндокутикулы. Её толщина с возрастом увеличивается и составляет от 0,1 до 0,6 мкм. Благодаря наличию в ней поровых каналов она участвует в водном и газовом обменах, а также выполняет защитную функцию [7]. Жизненный цикл клещей составляет 15–25 дней. Самка клеща откладывает яйца и погибает, через 60 часов образуются личинки, которые, питаясь остатками клеток эпидермиса и кожным салом, в течение 40 часов превращаются в неподвижную протонимфу. Через 72 часа в кожных покровах можно обнаружить подвижную дейтонимфу, а через 60 часов взрослую половозрелую особь, которая живёт около 1–2 недель, откладывает яйца и погибает [8].
В ранее опубликованном клиническом случае выявления клещей Demodex canis у пациентки О. 48 лет [9] был получен соскоб с поражённых областей кожи лица. В соскобе наравне с клещами Demodex folliculorum были также обнаружены клещи Demodex canis. Из анамнеза стало известно, что пациентка в быту находится в тесном контакте с собаками. После назначения стандартной схемы лечения (системное и местное использование препаратов группы 5-нитроимидазолов [10]) и проведения повторной акарограммы было зарегистрировано отсутствие клещей рода Demodex в материалах соскоба [11]. Через полгода пациентка обратилась повторно. При осмотре выявлена сходная с прежней клиническая картина, и высказано предположение о возможном рецидиве заболевания в связи с реинвазией клещами Demodex.
Проведенная акарограмма вновь зафиксировала наличие клещей Demodex folliculorum и Demodex canis в материалах соскоба. Это послужило причиной для исследования in vitro акарицидного действия экспериментального препарата Д-18, а также сравнения его с препаратом, содержащим ивермектин 1%. Целью исследования стало изучение акарицидного эффекта препарата Д-18 (АО «Ретиноиды», Россия) в отношении клещей Demodex folliculorum и Demodex canis в эксперименте in vitro.
В МКБ-11 планируется выделение нового заболевания демодекоз [12], что активизировало разработку новых лекарственных препаратов в мировом фармацевтическом пространстве для его лечения. Согласуясь с концепцией импортозамещения, проводимого на российском фармацевтическом рынке, представляется целесообразной разработка отечественного препарата, который будет обладать высокой эффективностью в применении, а также значительно большей доступностью для пациента.
Исследование in vitro акарицидного действия препарата Д-18 (АО «Ретиноиды», Россия) в отношении клещей Demodex canis и Demodex folliculorum, полученных от человека.
Исследование проводили в экспериментальной биологической клинике АО «Ретиноиды» [13, 14] в соответствии с Принципами надлежащей лабораторной практики [15, 16]. Для исследования был отобран материал содержимого сально-волосяных комплексов, полученный при проведении соскоба с поражённых участков кожи лица у пациентки О. 48 лет. Под микроскопом взрослых особей выделяли и помещали в 50% водный раствор глицерина. Для опытов отбирали клещей с выраженной двигательной активностью тела, конечностей и ротового аппарата. Препаровальной иглой их перемещали из капли раствора глицерина на левую половину стекла и вплотную окружали препаратом Д-18, его мазевой основой или препаратом ивермектин 1% в зависимости от группы исследования. Под микроскопом каждые полчаса с момента окружения препаратами оценивали степень двигательной активности по ранее опубликованной методике [17]. Гибель клещей констатировали по отсутствию признаков движения. Микроскопическое исследование проводили на световом микроскопе Axioskop 2 (Carl Zeiss, Германия). Для оценки среднего времени гибели клещей Demodex применяли методы описательной статистики. Для определения достоверности межгрупповых различий информацию анализировали параметрическими или непараметрическими критериями в зависимости от типа распределения количественных данных. При определении нормальности использовали критерий Колмогорова–Смирнова, который показал, что во всех случаях распределение величин являлось нормальным. Это позволило применять среднее значение (М) и стандартную ошибку среднего (SE), а также t-критерий Стьюдента для оценки достоверности различий между группами. Расчёты проводили с использованием программного обеспечения Microsoft Excel. Различия определяли при 5% уровне значимости.
Результаты исследования акарицидного действия препарата Д-18, его основы и препарата сравнения, содержащего ивермектин 1%, на клещах Demodex canis и Demodex folliculorum представлены в таблицах 1 и 2.
Воздействие | |||
---|---|---|---|
Интактные | Основа | Д-18 | Ивермектин 1% |
7,5±0,1 | 7,4±0,1 | 2,4*±0,1 | 2,0*±0,1 |
* – Достоверность различия изучаемого признака в сравнении с интактными клещами и клещами, окруженными основой препарата.
Воздействие | |||
---|---|---|---|
Интактные | Основа | Д-18 | Ивермектин 1% |
7,7±0,1 | 7,4±0,2 | 2,2*#±0,1 | 2,9*±0,1 |
* – Достоверность различия изучаемого признака в сравнении с интактными клещами, и клещами, окруженными основой препарата.
# – Достоверность различия изучаемого признака в сравнении с клещами, окруженными ивермектином.
Как видно из таблиц, применение основы препарата Д-18 не оказывает статистически значимого воздействия на гибель клещей Demodex canis. Отмечено сходное по времени гибели акарицидное действие нового экспериментального состава Д-18 и препарата ивермектин 1%, однако клещи вида Demodex canis гибнут в условиях применения последнего несколько дольше.
Демодекоз – паразитарное заболевание, возникающее в результате размножения клещей рода Demodex в коже. Локализованная форма демодекоза собак может исчезать спонтанно в течение 2–4 месяцев, в то время как генерализованная форма представляет угрозу жизни животных. У собак в возрасте до 2 лет выделяют: ювенильный генерализованный демодекоз, который является наследственным заболеванием, передаваемым аутосомальным рецессивным геном. У собак старше 2 лет эта патология носит название – демодекоз взрослых собак [18]. Сегодня наиболее распространенной является теория, согласно которой существует наследственный дефект Т-лимфоцитов, приводящий к повышенному размножению клещей рода Demodex. Если этот дефект выражен сильно, то следствием будет генерализованная форма демодекоза и выраженная недостаточность иммунной системы [6]. Также имеются сведения о попадании клещей крово- и лимфотоком в лимфоузлы, селезёнку, печень, почки, мочевой пузырь, кишечную стенку, лёгкие, щитовидную железу, мочу, кал, что свидетельствует о системности этой патологии [18].
В последнее время в практике врача дерматолога возросло число случаев выявления клещей рода Demodex, которые не всегда являются осложнениями сопутствующих заболеваний, таких как себорейный дерматит, розацеа, периоральный дерматит, алопеция, блефарит и др. Так, в 1995 году Б.Г. Коган и соавт. [19], а также M.J. Birnkrant et al. [20] высказали предположение, что демодекоз является хроническим паразитарным заболеванием. В дальнейшем эту точку зрения поддержали Ю.С. Бутов и О.Е. Акилов [21], а также Н.И. Сюч [22]. Т.М. Желтикова полагает, что состояние иммунной системы человека определяет течение демодекоза как самостоятельного заболевания или как симптома, сопутствующего основной патологии [23].
Известны клинические случаи выявления Demodex canis у человека [3, 9], а в литературе имеются сведения о большем генетическом родстве клещей Demodex folliculorum с Demodex canis, чем с видом Demodex brevis [24]. Из этого следует, что необходимо применение не только ранней диагностики заболевания, но и направленного этиологического лечения. В случае возможного возникновения признаков системности заболевания необходима комплексная терапия, включающая иммунологическое лечение.
Анализ представленных результатов исследования акарицидного действия экспериментального лекарственного препарата Д-18, его основы и препарата сравнения на клещах Demodex canis и Demodex folliculorum в исследовании in vitro позволил сделать следующие выводы:
Таким образом, в проведённом исследовании показан акарицидный эффект от применения препарата Д-18, а также препарата ивермектин 1% в эксперименте in vitro на клещах Demodex canis и Demodex folliculorum.
Можно полагать, что собаки, инфицированные клещами вида Demodex canis, являются релевантными животными по отношению к человеку [25].