Мазь Радевит^®, содержащая витамины А, Д и Е, оказывает дерматотропное и иммуномодулирующее действие в отношении Т- и В-лимфоцитов, стимулирует физиологическую и репаративную регенерации эпидермиса. Признаки её острой и хронической (специфической и неспецифической) токсичности не выявлены.

Эксперименты проведены на лабораторных животных. Исследовалась специфическая активность и безвредность мазей, содержащих ретинола пальмитат, эргокальциферол и aтокоферола ацетат в концентрациях, указанных в таблице 1.

Мази наносились на лишенную волосяного покрова кожу спины однократно или многократно в течение определенного периода времени и в соответствующих количествах в разных сериях опытов. Во всех экспериментах контролем служили интактные и получавшие мазевую основу животные.

Влияние на физиологическую регенерацию кожи

Изучение морфологического проявления эпителиотропного действия мази Радевит^® проведено на крысах-самках Вистар массой 180-200 г, которым ежедневно в течение 3-х месяцев наносили накожно по 0,5 г мази. В конце опыта животных усыпляли хлороформом, кожу фиксировали в смеси формалина, этанола и уксусной кислоты. Парафиновые срезы окрашивали рутинными красителями и анализировали с помощью светового микроскопа. Исследование показало, что длительное накожное нанесение мази Радевит^® сопровождается явлениями гиперплазии и гипертрофии эпидермиса. При этом шиповатый и зернистый слои были хорошо выражены, а роговой слой истончен. Во всех слоях эпидермиса встречались клетки с пикнотичными ядрами и вакуолизированной цитоплазмой. Волосяные фолликулы находились во всех стадиях развития, сальные железы были уменьшены в размерах, потовые железы существенно не изменились.

Влияние на репаративную регенерацию кожи

Репаративную регенерацию кожи под действием мази Радевит^® исследовали на моделях хирургических, химических и термических ран, сформированных на спине крыс-самок Вистар. Аппликацию мази и регистрацию размеров раны начинали с 3-7 дня после операции. После завершения опыта участки кожи области спины исследовали методом обзорной микроскопии. Установлено, что мазь Радевит^® оказывает благоприятное воздействие на процессы репарации. Это относится прежде всего к тем повреждениям, при которых сохраняются, хотя бы частично, структуры дермы и дериваты эпидермиса (термические и химические раны). Процессы активации репаративной регенерации идут на фоне усиления физиологической регенерации структур неизмененной кожи.

Влияние на иммунокомпетентные клетки

Одним из аспектов механизма действия жирорастворимых витаминов является их способность изменять реакции иммунитета, поэтому исследование иммуномодулирующего действия мази Радевит^® рассматривалось нами как обязательное в спектре изучения общефармакологического действия препарата. Опыты были поставлены на мышах-самцах F-1 с массой 16-18 г, которым наносили по 0,2 -0,3 г мази Радевит^®.

Установлено, что мазь вызывает умеренное стимулирующее действие на содержание Т- и В-лимфоцитов селезенки и модифицирующий эффект на функциональную активность перитонеальных макрофагов. Отмечено, что мазь до применения форболмиристатацетата снижала функциональную активность макрофагов. Добавление стимулятора резко повысило хемилюминесценцию этих клеток, но уровень активности макрофагов у мышей, получавших мазь, оставался более низким.

Изучение острой токсичности

Опыты по исследованию острой токсичности были поставлены на мышах обоего пола линии Balb c массой 18-20 г. Животным наносили 0,25 г мази состава № 1, в которой концентрация ретинола пальмитата была в 5 раз, а aтокоферола ацетата в 4 раза выше, чем в мази Радевит^®. О токсичности препарата судили по 10-дневной и отсроченной 15-дневной выживаемости. Все животные дожили до конца эксперимента, максимально переносимой дозы достичь не удалось. Следовательно, мазь, содержащая витамины А, Е и Д, обладает низкой острой токсичностью.

Исследование хронической токсичности

Исследование хронической токсичности проводили на половозрелых крысах-самках линии Вистар массой 165-175 г, которым ежедневно в течение трёх месяцев наносили по 0,5 г мази Радевит^® или мази состава № 1. Хроническую токсичность выявляли, определяя массу тела и внутренних органов крыс, исследуя состояние периферической крови, функциональную активность печени (тест гексеналового наркоза) и почек. Установлено, то нанесение мази Радевит^® также, как и мази состава № 1, не влияет на функциональную активность печени и почек и не вызывает существенных изменений массы тела и внутренних органов (тимуса, легкого, сердца, печени, почек и селезенки).

На следующем этапе изучения хронической токсичности были проведены гистологические исследования, позволяющие более детально оценить изменения структуры внутренних органов. Исследования были выполнены на крысах-самцах линии Вистар массой 200-230 г, которым ежедневно в течение трёх месяцев наносили 0,5 г мази состава № 1. В конце опыта животных умерщвляли хлороформом, внутренние органы фиксировали в формалине, заливали в парафин. Гистологические срезы окрашивали рутинными красителями и просматривали в световом микроскопе.

Все животные были живы до конца эксперимента. Изменений гистоструктуры сердца и легких при сравнении с контролем не установлено. Обнаруженные незначительные изменения в тонкой кишке, тимусе, селезенке и мезентериальном лимфатическом узле скорее всего были обусловлены проявлением витаминных и иммуномоделирующих свойств витамина А. И только состояние печени и почек выявило незначительный (статистически недостоверный) токсический эффект мази состава № 1. Поскольку мазь такого состава имеет увеличенное содержание субстанций, то, оценивая полученные результаты, можно было предположить, что мазь Радевит^® хронической токсичностью не обладает.

С целью проверки этого предположения крысам-самцам линии Вистар массой 180-200 г наносили ежедневно в течение трёх месяцев 0,5 г мази Радевит^®. Гистологические препараты готовили и исследовали так же, как и в предыдущем опыте. Все животные оставались живы до конца эксперимента. Различий в морфологии сердца, легких, тимуса, печени, почек, селезенки, мезентериального лимфатического узла и тонкой кишки крыс подопытной и контрольных групп обнаружено не было.

В дальнейших более углубленных исследованиях были использованы молодые половозрелые крысы-самцы линии Вистар массой 120-140 г. Условия эксперимента те же, что и в предшествующем опыте. Гистологические препараты готовили, как описано выше. Изучалась структура следующих органов и органных систем: - кора головного мозга; грудной отдел спинного мозга; вегетативные ганглии и нервные волокна стенки тонкой кишки; нервные стволы и нервные волокна дермы; тела и отростки нейронов сетчатой оболочки глаза; - легкие, трахея, крупные, средние и мелкие бронхи; - сосуды кожи, сердца, печени, селезенки, сетчатой оболочки глаза; - желудок, тонкая и толстая кишка, печень, поджелудочная железа; - почки, мочевой пузырь; - надпочечники, семенники, щитовидная железа, паращитовидная железа; - тимус, селезенка, мезентериальный лимфатический узел; - мазки крови и красного костного мозга из бедренной кости. Каких-либо различий в структуре перечисленных органов и систем животных подопытной и контрольных групп не выявлено. Это означает, что применение мази Радевит^® не приводит к изменению гистоструктуры внутренних органов. Таким образом, показано, что мазь Радевит^® является малотоксичным препаратом, она обладает низкой острой токсичностью и не проявляет признаков хронической токсичности.

Влияние на функциональную активность печени

Опыты были поставлены на крысах, которым ежедневно в течение 3 месяцев наносили по 0,5 г мазей состава № 1 или № 2, содержащих витамины А и Е в разных концентрациях. Функциональную активность печени определяли в тесте с гексеналовым наркозом, а также по показателям содержания глюкозы, общего белка, холестерина, креатинина, билирубина, активности трансаминаз и щелочной фосфатазы в плазме крови. Мази, содержащие витамины А, Д и Е в избранных концентрациях, не оказывают существенного токсического влияния на показатели функции печени, в том числе на показатели белкового, жирового и углеводного обменов.

Влияние на концентрацию кальция, неорганического фосфора и активность щелочной фосфатазы в крови

Наличие в мази Радевит^® жирорастворимых витаминов, в том числе витамина Д2 определило необходимость изучения действия её длительной аппликации на показатели кальциевого обмена. Опыты проводили на крысах-самках Вистар, которым в течение трех недель наносили по 0,5 г мази Радевит^®. Различия в концентрациях кальция, неорганического фосфора, а также в активности щелочной фосфатазы в крови экспериментальных и контрольных животных не имели статистически значимого характера. Это позволяет считать, что длительное нанесение на кожу мази Радевит^® не оказывает существенного влияния на показатели метаболизма кальция.

Местнораздражающие и аллергизирующие свойства

Исследования проводили на пятнистых морских свинках-самках массой 180-200 г. На кожу боковой поверхности живота в течение двух недель наносили мази составов № 1 и № 2. Мазь 1-го состава проявляла небольшое, быстро проходящее местнораздражающее действие, мазь 2-го состава местнораздражающим действием не обладала. Сенсибилизацию животных выявляли через 5 дней после окончания нанесения препаратов. На кожу уха наносили 0,1 г мазей 1-го и 2-го составов. Местную аллергическую реакцию оценивали через 6, 12 и 24ч по величине отека (толщину уха измеряли микрометром). Исследования показали, что мазь Радевит^® аллергизирующим действием не обладает.

Изучение возможной канцерогенной активности

Для оценки способности мази Радевит^® изменять динамику опухолевого роста использовали штаммы перевиваемых на мышах опухолей, которые выращивали в сингенных и аллогенных моделях. Взвесь клеток каждого штамма опухолей в среде 199 вводили внутримышечно либо подкожно. Исследование проводили с мазями двух составов. Установлено, что мази как 1-го, так и 2-го составов не ускоряют роста перевиваемых опухолей. Напротив, мазь 1-го состава способна тормозить, правда незначительно (различия с контролем недостоверны), рост новообразований. Для выявления канцеропротекторного эффекта участок кожи мышей обрабатывали раствором метилхолантрена в ацетоне, а затем через 0,5 ч сюда же наносили мази 1-го либо 2-го составов. Действие оценивали по количеству возникающих папиллом и раков. Исследование показало, что изучаемые мази не обладают канцерогенным эффектом и сами способны оказывать канцеропротекторное действие.

О возможных мутагенных свойствах

Фармакологические свойства мази Радевит^® обусловлены присутствием в ней витаминов А, Е и Д, которые, как известно, мутагенной активностью не обладают. Поэтому мутагенные эффекты мази не выявляли. Гораздо интереснее было изучить неисследованное ранее влияние препарата на хромосомы клеток красного костного мозга. Был проведен анализ состояния хромосом делящихся клеток эритроидного и миелоидного рядов красного костного мозга. Опыты были поставлены на морских свинках-альбиносах, которым ежедневно в течение 1-4 недель наносили накожно по 0,5 г мази Радевит^®. Состояние хромосом оценивали на стадии метафазы (материнская звезда, метафазная пластинка). Учитывали количество клеток с поврежденными хромосомами (имеющими отчетливо удлиненные или укороченные плечи). Проведенное исследование показало, что мазь Радевит^® не обладает способностью повреждать хромосомы красного костного мозга морских свинок.

Исследование возможных тератогенных свойств

Возможные тератогенные свойства мази Радевит^® изучали на беременных крысах линии Вистар массой 220-230 г. Мазь наносили один раз в день с 1-го по 6-й , с 6-го по 16-ый или с 16-го по 19-й дни беременности. Эмбриотоксические свойства мази оценивали по пред- и постимплантационной смертности плодов, для чего подсчитывали количество желтых тел в яичнике, количество мест имплантации в матке и количество живых плодов. О тератогенных свойствах судили по результатам исследования внутренних органов и опорно-двигательного аппарата плодов на наличие врожденных аномалий. Проведенные исследования не выявили ни эмбриотоксических, ни тератогенных свойств мази Радевит^®.

В.И. Ноздрин, К.С. Гузев, Ю.Т. Волков, Ю.П. Архапчев, Л.Н. Поляченко