В последние годы в дерматологической практике все большее распространение получают препараты активной и малотоксичной формы витамина А - ретинола пальмитат (РП). Учитывая особенности механизма действия РП - способность стимулировать процессы пролиферации и дифференцировки эпителиально-клеточных структур кожи, протекающие в основном в ночные и ранние утренние часы, лечащему врачу важно знать оптимальные сроки приема лекарственного препарата и рекомендовать такую лекарственную форму, которая обеспечивала бы в крови поддержание определенной концентрации ретиноида.

Цель работы - изучение фармакокинетики (ФК) РП, применяемого внутрь в виде масляного раствора в сравнении с местной аппликацией в виде мазей различного состава.

Объектами исследования служили: свежеприготовленный раствор РП в соевом масле, без антисептиков и антиоксидантов (1 гр); 5%-ная мазь РП, приготовленная на эмульсионной основе (м/в) (2 гр); 5%-ная мазь РП, приготовленная на аналогичном носителе , но с добавлением метилурацила и диметилсульфоксида (димексида) (3 г); мазь с жирорастворимыми витаминами ретинола пальмитатом, токоферола ацетатом и эргокальциферолом (4 г).

Опыты проводили на половозрелых крысах-самцах линии Вистар, массой 200-250 г по 7 животных в каждой группе. Масляный раствор РП вводили с помощью эластичного зонда в желудок в объеме 0,5 мл. Группам животных, получающих мази за сутки до проведения эксперимента на спинке выстригали участок кожи размером 4 на 4 см. Навеску мази, массой 0,5 г(10 мг/кг) наносили на подготовленный участок кожи и втирали шпателем в течение 2 минут. Затем животных помещали в индивидуальные клетки предотвращающие слизывание препарата. Через 0,5 ч,1 ч, 2 ч, 4 ч,6 ч 24 ч после легкого эфирного наркоза животных декапитировали, кровь собирали в центрифужные пробирки, отстаивали в течение 30-40 мин при комнатной температуре, центрифугировали при 1500 об/мин в течение 30 мин, отбирали сыворотку крови, замораживали и хранили при -20 С. В качестве контроля использовали сыворотку крови интактных животных.

Количественное определение РП в сыворотке крови крыс осуществляли на системе для высокоэффективной жидкостной хроматографии фирмы "Altex" /США/, колонке Ultraspher-Si 5 мкм /4,6 х 250 мм/, элюирующая система гексан-изопропиловый спирт 99,5 : 0,5, скорость потока 1 мл /мин. Детектирование осуществляли на ультрафиолетовом детекторе фирмы Hitachi /Япония/ при 325 нм. Чувствительность 0,010 АЕ полной шкалы.

Результат определения концентрации РП в крови крыс, после однократного применения его лекарственных форм представлен в таблице 1.

Из данных таблицы видно, что при однократном введении РП в виде масляного раствора достоверное повышение уровня лекарственного вещества в крови и максимальное его содержание обнаруживается через 1 час, равное 5,80 мкг/мл. Через 2 и 4 часа концентрация РП медленно снижается до 4,6 и 2,11 мкг/мл соответственно, а к 6 часам достигает базового уровня, составляющего 0,61 мкг/мл.

После применения мази с РП максимальная концентрация лекарственного вещества в крови устанавливается через 2 часа и равняется 4,86 мкг/мл. К четырем часам наблюдается ее незначительное снижение до 3,28 мкг/мл, а 6 часам удается обнаружить лишь 0,65 мкг/мл, что соответствует его содержанию в интактной группе животных.

Сравнение этих экспериментальных данных позволяет констатировать достоверную одночасовую задержку поступления + РП в кровь при использовании мази. При этом абсолютная величина максимального уровня РП в крови, хотя и наступает через 2 часа, практически не отличается от такового при оральном приеме ретиноида.

Добавление в мазь с РП метилурацила и диметилсульфоксида изменяет картину всасывания ретиноида. Так,уже через 1 час обнаруживается максимальная концентрация вещества в крови, равная 7,87 мкг/мл, что почти в 2 раза превышает таковую при оральном приеме масляного раствора и местной аппликации мази только с РП. В дальнейшем уровень препарата в крови медленно снижается и через 4 и 6 часов равняется 4,72 и 2,40 мкг/мл соответственно. Необходимо отметить, что применение этой мази позволяет за счет высокой концентрации ретиноида в крови значительно удлинить время циркулирования лекарственного вещества в кровяном русле. Так, через 24 часа после нанесения препарата найдено 2,73 мкг/мл РП, что в 5 раз превышает базовый уровень ретиноида. Т.е. введение в состав мази метилурацила и диметилсульфоксида способствует более быстрому и полному проникновению РП в кровь крыс.

При аппликации мази с витаминами А, Е, Д достоверное увеличение исходного уровня РП определяется уже через 0,5 часа. К первому часу концентрация ретиноида возрастает до 11,25 мкг/мл и сохраняется на том же уровне на протяжении 2 часов. Через 4 часа отмечено падение содержания лекарственного вещества до 8,25 мкг/мл, а через 6 часов д о 4,60 мкг/мл. К 24 часам содержание РП в кровяном русле сохраняется на уровне 4,27 мкг/мл.

Анализ образцов крови крыс, забитых через 48 часов, после применения препарата, показал, что в течение этого времени РП полностью выводится из организма и содержание его в крови соответствует концентрации лекарственного вещества интактной группы.

На основании полученных результатов, с помощью одночастевой модели, описывающей внемодельное всасывание, были рассчитаны основные фармакокинетичекие параметры РП при оральном и чрезкожном введении, которые представлены в таблице 2.

При расчетах параметров фармакокинетики РП с помощью одночастевой мощели не удалось определить величину константы всасывания. На наш взгляд, это связано не с недостатком выбранной математической модели, а с отсутствием каких-либо данных о содержании РП в крови животных в фазе всасывания (менее 0,5ч.), связанного с его быстрым поступлением в кровь. Это объясняется прежде всего высокой биологической активностью ретиноида, родством с естественными продуктами жизнедеятельности и наличием специальных рецепторов-переносчиков, обеспечивающих его транспорт к органам мишеням.

Расчеты показывают, что после однократного приема РП внутрь в виде масляного раствора константа его элиминацииравняется 0,0293 1/час, время полувыведения 23,7 час. Полное всасывание лекарственного вещества в желудочно-кишечном тракте осуществляется за 2 часа, а среднее время удержания соответствует 33,3 часам. Освобождение крови животных от РП идет со скоростью 12,2 мл/мин. Величина объема кажущегося распределения препарата равна 25 л., а площадь под фармакокинетической кривой "концентрация-время"- 68,2 мкг/ч/мл. Важно отметить, что масляный раствор РП, принимаемый peros, был принят нами за лекарственную форму-сравнения, а величина площади под "фармакологической кривой"- за 100%.

При аппликации мази с РП величина многих параметров практически не меняется. Так, остались без изменения константа элиминации (О,0282 1/ч),время полувыведения (24,6 ч) среднее время удержания (29,9 ч),общий клиренс (10,9 мл/ мин) и объем распределения (23,3 л). Однако, изменение пути введения лекарственного препарата более чем в два раза удлинило время всасывания (4,5 ч),отодвинуло время достижения максимальной концентрации с одного до двух часов, что в свою очередь уменьшило величину площади под фармакологической кривой и снизило значение ОБД до 56,3%.Полученные данные свидетельствуют, что применение мази позволяет добиться высокого уровня РП в крови, но он наступает с заметной задержкой, что ведет к снижению биодоступности лекарственного вещества. Следует подчеркнуть, что предлагаемая мазь не должна подменять оральный прием РП. Она разрабатывается для лечения кожи и концентрация ретиноида в крови не позволяет судить о его количестве в коже. В связи с этим рассуждения об эквивалентности приема различных лекарственных препаратов РП носит условный характер.

Добавление в состав мази метилурацила и, вероятно, в большей степени диметилсульфоксида изменяет поведение РП в организме. Так в фазе всасывания сокращается время полного всасывания и время достижения максимальной концентрации до 2 и 1 часа соответственно. Возросла и С_max. до 7,87 мкг/мл, что превосходит этот показатель как при приеме препарата внутрь, так и после нанесения мази РП местно. В фазе выведения отмечается рост константы элиминации до 0,0659 1/час и как следствие сокращение времени полувыведения до 10,5 ч.Уменьшилось среднее время удерживания (15 ч) и общий клиренс (6,77 мл/мин).Более чем в 4 раза уменьшился объем распределения РП (6,16 л)и возросла площадь под фармакологической кривой (61,6 мкг/ч/мл). Расчет ОБД показал повышение этого параметра до 90%.Анализ полученных данных свидетельствует, что добавление в мазь метилурацила и диметилсульфоксида стимулирует всасывание РП из мази в кровь и элиминации его из кровяного русла. Увеличение ОБД РП из мази этого состава делает эквивалентным его прием в сравнении с оральным приемом масляного раствора.

При применении мази с жирорастворимыми витаминами значения константы элиминации, времени полувыведения и среднее время удерживания равняются 0,0316 1/час, 22,0 часа, и 29,9 часа, что соответствует этим величинам при приеме раствора и мази с РП. Отмечено увеличение максимальной концентрации РП в крови до 11,45 мкг/мл, времени полного всасывания до 6,0 часов и уменьшение времени достижения максимальной концентрации до 1 часа, объёма распределения до 3,70 л., общего клиренса до 1,95 мл/мин. Площадь под кривой "концентрация-время" увеличилась до 214 мкг/ч/мл, а относительная биодоступность до 313,78%. Т.е. совместное применение трех жирорастворимых витаминов в форме мази ведет к более полному всасыванию РП через кожу и более чем в три раза повышает его биодоступность.

По данным эксперимента сделаны следующие выводы:

1. РП - высокоактивная форма витамина А быстро всасывается как в желудочно-кишечном тракте животных так и при аппликации мази через кожу.
2. Добавляя в состав мазей с РП дополнительные вспомогательные вещества можно значительно повышать его биодоступность.
3. Прием лекарственных препаратов с РП как масляных растворов , так и мазевых форм необходимо проводить поздно вечером, на ночь. Тогда пик максимальной концентрации РП в крови и в коже будет приходиться на период сна , а именно в это время клетки кожи пролиферируют и проходят стадию дифференцировки.

Гузев К.С., Архапчев Ю.П.