В.И. Ноздрин, К.С. Гузев, Ю.П. Архапчев – ЗАО «Ретиноиды», Москва, Россия;

---

Метилурацил (6-метилурацил, 6-метил-2,4-пиримидиндион, 6-метил-1,2,3,4-тетрагидропиримидин - 2, 4-дион, диоксометилтетрагидропиримидин) – известная субстанция, применяемая в лечении заболеваний человека самой разной этиологии. Из лекарственных форм с метилурацилом (МУ) наиболее широкое распространение получили таблетки, суппозитории, аэрозоли и мази [6].

На протяжении нескольких десятилетий 10 % мазь с МУ используется в хирургии при лечении ран, ожогов и обморожений. В качестве носителя при её изготовлении применяется смесь ланолина и вазелина, которая давно уже не соответствует ряду биофармацевтических требований: углеводородные носители трудно распределяются по раневой поверхности, медленно и в незначительном количестве передают тканям лекарственное вещество [4, 5]. Кроме того, основы, содержащие эти компоненты, имея выраженный гидрофобный характер, не способны поглощать воду, поэтому на коже образуется слой кожного экссудата или пота, который препятствует контакту носителя с эпидермисом. Субстанции из таких мазей трудно проникают в кожу, что снижает ожидаемое терапевтическое действие [3]. Для увеличения биодоступности МУ из мази проводились исследования по замене низкоэффективного носителя на другой [1, 7], но отечественная фармацевтическая промышленность продолжает выпускать мазь с МУ на ланолин-вазелиновой основе. Нами также был проведён эксперимент по изучению фармацевтической доступности МУ из эмульсионной мази в сравнении с традиционным препаратом [3]. Однако лишь по прошествии ряда лет, при работе над мазью Стизамет^® нам удалось вновь вернуться к изучению этой проблемы.

Цель исследования – изучить в эксперименте на животных фармакокинетику МУ после аппликации различных мазей.

Объекты и методы исследования

Объекты исследования. Мазь Стизамет^®, содержащая 3,0 % МУ и приготовленная на эмульсионной основе (патент RU 2135180 с приоритетом от 15.02.99, ФСП 42-0066-1742-01), 10 % мазь с МУ (10% МУ) (ФС 42-1993-96) и субстанция 6-метилурацила (ФС 42-2255-95).

Экспериментальные животные. Исследование проводили на половозрелых аутбредных крысах-самках, в каждую группу входило по 6–7 животных массой 180–220 г. Животных содержали в условиях вивария ЗАО "Ретиноиды" при свободном доступе к корму и воде. Корм животных представлял собой гранулированный концентрат с добавлением мяса и овощей. За 18 часов до забора крови корм у животных изымался. Эксперимент проводили с 8 часов утра. В течение этого времени животные получали только воду.

При исследовании всасывания и элиминации метuлурацuла из кровотока животные были разделены на 3 группы и помещены в зажимные клетки. Первой группе в/в (хвостовая вена) вводили около 1 мл 0,4 % раствора МУ (20 мг на кг массы тела), 2-й и 3-й группе на выстриженные участки межлопаточной области спины размером 4х4 см наносили в количестве 0,5 г 10 % МУ и мазь Стизамет^® соответственно. Мази втирали в течение 5 мин. Содержание МУ в сыворотке крови определяли через 0,25, 0,5, 1, 2, 6, 12, 24 и 48 часов. Декапитацию животных осуществляли в условиях лёгкого эфирного наркоза. Кровь собирали в центрифужные пробирки, отстаивали в течение 30 мин (в темноте при комнатной температуре) и центрифугировали при 1500 об/мин в течение 10 мин. Полученную сыворотку замораживали и хранили при температуре минус 20 °С до проведения анализа.

Аналитическое оборудование. Определение МУ в сыворотке крови осуществляли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Использовали систему для ВЭЖХ фирмы Jilson (Франция): ультрафиолетовый детектор с переменной длиной волны Holochrom, персональный компьютер с программой «Мультихром» для обработки хроматограмм («Амперсанд», Москва), стальная аналитическая колонка (8,0 х 12,0 мм), заполненная сорбентом Ultrasep-C18, размер частиц 5 мкм. Элюирующая система метанол – вода, скорость потока 0,5 мл/мин. Детектирование при 260 нм, чувствительность 0,010 адсорбционных единиц полной шкалы. В качестве стандартного образца при определении 6-метилурацила использовали 6-methyluracil (2,4-Dihydroxy-6-methylpyrimidine) фирмы Sigma (Германия).

Методика количественного определения МУ в сыворотке крови. 0,1 мл сыворотки крови смешивали с 0,9 мл метилового спирта, встряхивали на вихревом смесителе в течение 30 сек и центрифугировали при 1500 об/мин в течение 10 минут. 50 мкл надосадочной жидкости вкалывали в жидкостной хроматограф. Параллельно в хроматограф вводили 25, 50, 100 и 200 нг стандарта МУ для построения калибровочного графика и расчёта его содержания в образцах сыворотки крови.

Расчёт фармакокинетических параметров проводили с помощью специальной компьютерной программы ASKID (Дорохов В.В., Холодов Л.Е., 1996).

Полученные результаты

Результаты определения МУ в сыворотке крови и фармакокинетические параметры представлены в табл. 1, 2 и на рис. 1 и 2.

После в/в введения раствора МУ его концентрация в сыворотке крови экспериментальных животных начинает сразу снижаться. В течение 12 часов этот процесс продолжается, концентрация падает с 318±28 мкг/мл до 15±1,5 мкг/мл, что соответствует логарифмическому уравнению. Через 24 и 48 часов МУ не обнаруживается в сыворотке крови. Это может указывать на то, что при таком способе поступления МУ не аккумулируется в организме животных, а быстро выводится.

Содержание МУ в сыворотке крови после аппликации мази 10 % МУ (табл. 1) увеличивается на протяжении первого часа, достигая максимума 22,4±1,1 мкг/мл. Однако уже через 2 часа этот показатель резко снижается до 5,25±0,54 мкг/мл, а через 12 и 24 часа составляет 1,1±0,15 мкг/мл и 0,35±0,03 мкг/мл соответственно. При аппликации мази Стизамет^® максимальное содержание МУ в сыворотке крови достигается только через 2 часа (9,56±0,47 мкг/мл). Однако на протяжении последующих 12 и 24 часов концентрация МУ в сыворотке крови почти в 4,2 и 7,5 раз выше по сравнению с показателями 10 % мази МУ.

Такое различие между всасыванием субстанции из мази 10 % МУ и мази Стизамет^® может быть объяснено липофильным характером мазевой основы 10 % МУ. При нанесении 10 % мази, имеющей ланолинвазелиновую основу, происходит быстрое всасывание МУ из прилежащих к коже слоёв мази. 10 % концентрация МУ в мази обусловливает быстрый рост его содержания в крови. В дальнейшем ланолин-вазелиновая основа, нарушая нормальное испарение выделенной кожей влаги, ведёт к её отпотеванию и образованию на коже тонкой водной плёнки, препятствующей адгезии препарата и диффузии МУ из липофильного носителя. Кроме того, вязкая мазевая основа и суспензионный характер субстанции препятствует равномерному распределению МУ в мази.

Таким образом, применение 10 % мази МУ на ланолин-вазелиновой основе обеспечивает высокое, но кратковременное поступление МУ в кровоток. Поступление МУ из мази Стизамет^® начинается также с момента нанесения и только через 2 часа достигает максимального значения. В дальнейшем уровень лекарственного вещества в крови сохраняется высоким даже через 24 часа. Следует отметить, что субстанция в этой мази находится в кристаллическом состоянии, так как вводится в мазевую основу по типу суспензии. Это делает её похожей на 10 % МУ. Однако замена ланолин-вазелиновой основы на эмульсионную способствует более полному поступлению лекарственного вещества из мази через кожу.

На основании полученных данных с помощью одночастевой модели со всасыванием были определены основные фармакокинетические параметры МУ после аппликаций 10 % мази с МУ и мази Стизамет^®.

Величины констант элиминации и времени полувыведения МУ при использовании обеих мазей не имеют достоверного различия; скорость выведения МУ из кровотока (общий клиренс) в случае с мазью 10 % МУ почти в 3 раза выше, чем при аппликации мази Стизамет^®. Результаты эксперимента позволяют предположить, что мазь 3 % МУ на эмульсионной основе может оказывать биологический эффект более длительное время, чем мазь 10% МУ. Об этом свидетельствует рост относительной биологической доступности МУ из мази, приготовленной на эмульсионной основе. Относительная биодоступность МУ из мази Стизамет^® почти в 3 раза выше, чем этот показатель из 10 % МУ. Расчет абсолютной биодоступности МУ из мазей относительно в/в введения лекарственного вещества показал, что при аппликации 10 % МУ этот показатель составил 0,65 %, а при использовании мази Стизамет^® – 1,8 %. Установленные факты позволяют заключить, что мазь Стизамет^® обладает более высокой биологической доступностью.

Таким образом, поступление МУ из 10 % МУ в кровоток через кожу экспериментальных животных происходит менее эффективно, чем из мази Стизамет^®, что свидетельствует о более высокой биологической доступно- сти МУ из мази на эмульсионной основе.

Выводы

1. При внутривенном введении МУ он не аккумулируется в организме, а быстро выводится.
2. Замена ланолин-вазелиновой основы на эмульсионную способствует более полному поступлению МУ из мази через кожу.
3. Относительная биодоступность МУ из мази Стизамет^® почти в 3 раза выше по сравнению с таковой из мази с 10 % МУ.
4. Замена ланолин-вазелиновой основы на эмульсионную позволяет снизить содержание МУ в мази до 3%.

Литература

1. Бондаренко О.Л. Разработка новых мазевых основ и использование их в технологии мазей с фурациллином и метилурацилом для лечения ран и ожогов: Дис. канд. фарм. наук. – 1995.
2. Грецкий В.М., Цагарейшвили Г.В. Носители лекарственных веществ в мазях // Тбилиси: Изд. МЕЦНИЕРЕБА, 1979. – С. 203.
3. Гузев К.С., Сахатов М.З., Грецкий В.М., Ноздрин В.И. Исследование фармацевтической доступности метилурацила из мази // В сб.: Современные исследования технологии и использование лекарственных препаратов. – Ашхабад, 1993. – С. 178–183.
4. Ли В.Н. Ланолин и его производные в фармацевтической практике // Аптечное дело за рубежом. – 1972. – Вып.6. – С. 56–62.
5. Петрунь Н.М., Алюшин М.Т. Влияние некоторых веществ, применяемых в качестве основ для приготовления мазей, на газообмен и теплообмен через кожу человека // Вестник дерматол. и венерол. – 1964. – №8. – С. 15–20.
6. Регистр лекарственных средств России РЛС Энциклопедия лекарств, 16-й выпуск / Гл. ред. Г.Л. Вышковский. – М.: «РЛС-2008», 2007. – С. 551.
7. Сытник Г.Н., Бабиян Л.К. Влияние вида основы на высвобождение метилурацила из мазей // Перм. фарм. ин-т. – Пермь, 1988. – 5 с. – Рукопись деп. в НПО СОЮЗМЕДИНФОРМ 26.09.88, № 16257. МРЖ, раздел 22, 1989, № 2, реф. 317.