Экспериментальное исследование действия на сальные железы нафталанской нефти в составе препарата для накожных аппликаций

Г.В. ТРУНОВА, Т.А. БЕЛОУСОВА, К.С. ГУЗЕВ, О.В. КАЛИНИНА, В.И. НОЗДРИН

ЗАО Фармацевтическое научно-производственное предприятие «Ретиноиды», Москва, Россия, 111123

Резюме

Дерматотропные эффекты нафталанской нефти известны и нашли применение в клинике, однако не все они исследованы в эксперименте. Так, в доступной литературе отсутствуют данные об эффектах нафталана в отношении сальных желез экспериментальных животных.

Цель исследования — изучение в эксперименте гистоструктурной характеристики сальных желез при накожных аппликациях препарата Нафтадерм, содержащего нафталанскую нефть (10% линимент нафталанской нефти). Исследование имеет прикладной характер и представлено в виде краткого сообщения.

Материал и методы. На межлопаточную область мышей-самцов в течение 2 нед ежедневно однократно наносили препарат Нафтадерм. Кожу из зоны аппликаций изучали на окрашенных гематоксилином и эозином гистологических срезах с использованием морфометрии. Контролем служила кожа животных без воздействия.

Результаты. В коже опытных мышей в сравнении с контролем сальные железы встречаются не во всех полях зрения, их секреторные отделы редуцированы. Морфометрические исследования выявили, что в результате воздействия препарата, содержащего нафталанскую нефть, число профилей ацинусов сальных желез в поле зрения микроскопа и их площади уменьшаются статистически значимо в сравнении с контролем.

Заключение. Полученные результаты свидетельствуют, что одним из проявлений фармакологической дерматотропной активности нафталанской нефти является себостатический эффект.

Ключевые слова: сальные железы, нафталанская нефть, экспериментальное исследование, морфометрия.


Нафталанская нефть (НН), которую также называют «нафталан», является известным лекарственным средством поливалентного действия, обладающим рядом местных и системных фармакологических эффектов [1]. В клинической практике используют такие проявления биологической активности нафталана, как противовоспалительное, местноанестезирующее, сосудорасширяющее, ранозаживляющее, противосвертывающее, десенсибилизирующее, противомикробное и фунгицидное действия. Большинство перечисленных эффектов может быть востребовано при лечении кожных заболеваний. Применение препаратов НН показано при псориазе, экземе, нейродермите, себорее, фурункулах, сикозе, пиодермиях, почеcухе, ранах, пролежнях, плохо заживающих язвах, рожистом воспалении [2]. В последние годы появился ряд сообщений об эффективности использования при лечении себорейного дерматита (СД) 50% нафталанового спирта в виде топической монотерапии или в сочетании с пероральным применением ретинола пальмитата [3, 4]. Авторами на аутопсийном, биопсийном и клиническом материале с применением морфологических, иммуногистохимических, морфометрических и функциональных методов было показано, что возникновение и развитие СД в значительной степени обусловлены интенсивным функционированием сальных желез (СЖ). В связи с этим был сделан вывод, что подход к лечению этого заболевания должен быть направлен на снижение салообразования. Из данных литературы известно, что препараты НН эффективны при лечении СД, но в эксперименте их действие на СЖ практически не изучалось.

Цель исследования — исследование гистоструктурной характеристики СЖ кожи экспериментальных животных в условиях воздействия НН на примере накожного нанесения препарата Нафтадерм. Исследование имеет прикладной характер и представлено в виде краткого сообщения.

Материал и методы

Препарат Нафтадерм (линимент нафталанской нефти 10%), имеющий запатентованный состав (патент РФ с приоритетом от 19.01.99), в течение почти 15 лет выпускает ЗАО «Ретиноиды».

В исследовании были использованы беспородные мыши-самцы массой 30—35 г, содержавшиеся в условиях вивария Экспериментальной биологической клиники ЗАО «Ретиноиды» в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями к устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев) (Постановление №51 от 29.08.14 об утверждении СП 2.2.1.3218-1).

Были исследованы две группы мышей по 8 особей в каждой. Контрольную группу составили животные без воздействия, опытную — мыши, которым в течение 2 нед ежедневно однократно наносили на лишенный волосяного покрова (с применением триммера) участок спины площадью 2×2 см препарат Нафтадерм в разовой дозе 0,3 г. Первую аппликацию проводили через 2 дня после стрижки. Контрольные мыши также подвергались выстриганию шерсти на спине.

Животных выводили из эксперимента на следующий день после окончания аппликаций путем дислокации шейных позвонков. Фрагменты кожи спины (у опытных животных из зоны нанесения препарата) фиксировали в расправленном состоянии в 10% забуференном формалине, дегидратировали в спиртах возрастающей концентрации и заливали в смесь Histomix («Биовитрум», Россия). Срезы окрашивали гематоксилином и эозином и изучали подсветовым микроскопом Axioskop 2 («Carl Zeiss», Германия). Число профилей ацинусов СЖ подсчитывали при использовании объектива с 40-кратным увеличением в 20 полях зрения подряд от каждого животного. Микрофотографирование и определение площади сечений секреторных отделов СЖ проводили на аппаратно-программном комплексе, включающем микроскоп Axioskop 2, камеру AxioCam и систему формирования изображения AxioVision («Carl Zeiss», Германия). У каждого животного определяли площади 30 расположенных подряд профилей ацинусов.

Статистическую обработку результатов морфометрических исследований проводили с использованием t-критерия Стьюдента. Статистически значимыми считали результаты с уровнем вероятности не менее 95%.

Результаты

Эпидермис кожи контрольных мышей в высоту насчитывает от базальной мембраны до зернистого слоя 2—3 клетки, образует кнаружи небольшие выступы. Эпидермальные гребешки и сосочки отсутствуют. Зернистый слой тонкий состоит из 1—2 слоев плоских кератиноцитов с базофильными гранулами кератогиалина в цитоплазме. Роговой слой представлен узкой, прилежащей к клеточному эпидермису, пластиной компактного кератина, над которым располагаются рыхлые кератиновые пласты. Сально-волосяные комплексы расположены равномерно, содержат относительно крупные профили СЖ (рис. 1, а, б). Дерма представлена коллагеновыми и эластическими волокнами с диффузно расположенными резидентными клетками: зрелыми фибробластами, немногочисленными макрофагами, лимфоцитами, тучными клетками.

Эпидермис кожи мышей после аппликаций препарата Нафтадерм неравномерно утолщен; его высота до зернистого слоя составляет 4—6 клеток и более. Зернистый слой также шире, чем в контроле, представлен 2—3 рядами крупных клеток. В роговом слое ширина прилежащей к клеточному эпидермису пластины компактного кератина визуально увеличена. В дерме наблюдается диффузный, умеренно выраженный полиморфнолеточный инфильтрат, представленный лимфоцитами, макрофагами с примесью нейтрофилов, эозинофилов, тучных клеток. Большая часть волосяных фолликулов находится в стадии анагена, их наружные эпителиальные влагалища утолщены, кератиновые пласты глубоко проникают в воронку. Сальные железы встречаются не во всех полях зрения, уменьшены в размерах, профили их секреторных отделов редуцированы — иногда до 1—2 клеток (рис. 2, а, б). Морфометрические исследования выявили у опытных животных статистически значимое снижение числа профилей ацинусов в поле зрения микроскопа и их средней площади по сравнению с контролем (см. таблицу).

Кожа спины интактных мышей-самцов

A

Кожа спины интактных мышей-самцов

B

Рис. 1. Кожа спины интактных мышей-самцов (контроль).

а — обзор, б — выделенный фрагмент. Окраска гематоксилином и эозином.
Примечание. Здесь и на рис. 2: а — обзор, б — выделенный фрагмент.
Окраска гематоксилином и эозином. Эп — эпидермис, Д — дерма, СЖ — сальные железы (на рис. 2а указаны стрелками), ПЖК — подкожная жировая клетчатка; профили ацинусов сальных желез обведены с указанием их площадей.

Кожа мышей-самцов после окончания 2-недельных аппликаций препарата Нафтадерм

A

Кожа мышей-самцов после окончания 2-недельных аппликаций препарата Нафтадерм

B

Рис. 2. Кожа мышей-самцов после окончания 2-недельных аппликаций препарата Нафтадерм.

Морфометрические показатели сальных желез мышей-самцов после двухнедельных ежедневных аппликаций препарата Нафтадерм (n=8; M±m)
Группа Среднее число профилей ацинусов в поле зрения микроскопа (Ув. 40) Средняя площадь профилей ацинусов, мкм2
Интактный контроль 2,6±0,1 2040,8±70,7
Аппликации препарата Нафтадерм 1,7±0,1* 1235,5±55,5*

Примечание. * — достоверное отклонение от интактного контроля (р<0,005).

Обсуждение

Лечение некоторых распространенных кожных заболеваний (СД, угри) требует применения препаратов, подавляющих деятельность СЖ. В эксперименте на животных фармакологический себостатический эффект был доказан нами с применением морфометрии для препаратов изотретиноина (ретиноевая мазь 0,05 и 0,1%, Ретасол) [5] и дегтя березового (Берестин) [6]. В предыдущих публикациях, посвященных экспериментальному изучению биологической активности НН (субстанции) [2] и содержащего ее препарата Нафтадерм [2, 7]), основное внимание было уделено гиперпластическим процессам в эпидермисе, вызванным аппликациями на неповрежденную кожу животных названных выше лекарственных средств, а также ранозаживляющему действию Нафтадерма. Себостатический эффект НН, экспериментально продемонстрированный в настоящем исследовании, хорошо согласуется с клиническими данными, полученными при применении другого лекарственного средства из НН — нафталанового спирта (жидкость Розенталя), приготовленного по рецептурной прописи [3]. При этом О.В. Калининой (2014) были убедительно продемонстрированы снижение под влиянием этого средства жирности кожи (данные получены с использованием себуметрического датчика прибора «Soft Plus», производитель «Callegari, Catellanigroup», Италия) и высокая эффективность топической терапии СД. Таким образом, результаты представленного в настоящем сообщении эксперимента с аппликациями Нафтадерма, полученные с применением доказательного метода исследования, позволяют полагать, что себостатический эффект присущ и другим лекарственным и косметическим средствам, содержащим НН.

Заключение

Одним из проявлений фармакологической дерматотропной активности НН при наружном применении содержащих ее препаратов является экспериментально доказанный себостатический эффект.

Конфликт интересов: авторы заявляют об отсутствии потенциального конфликта интересов, требующих раскрытия в данной статье.

Литература

  1. Механизмы терапевтического действия нафталана. Баку. 1983;191.
    Алиев Н.Д., Тагдиси Д.Г., Мамедов Я.Д.
  2. Гистофармакологические исследования кожи. М. 2006;376.
    Ноздрин В.И., Белоусова Т.А., Альбанова В.И., Лаврик О.И.
  3. Изучение возрастных изменений сальных желез для обоснования морфогенетического подхода к лечению себорейного дерматита: Дис. …канд. мед. наук. Орел. 2014.
    Калинина О.В.
  4. Терапия себорейного дерматита волосистой части головы. Российский журнал кожных и венерических болезней. 2014;2:48-53.
    Калинина О.В., Евстафьев В.В., Альбанова В.И.
  5. Морфогенетический подход к лечению угрей ретиноидами. М. 2004.
    Ноздрин В.И., Альбанова В.И., Сазыкина Л.Н.
  6. Берестин. Под ред. Ноздрина В.И. и Альбановой В.И. М. 2011;360.
    Альбанова В.И., Белоусова Т.А., Гузев К.С., Жучков С.А., Крутых Е.Г, Лаврик О.И., Ноздрин В.И., Ноздрин К.В.
  7. Гистоструктурные и морфометрические проявления дерматотропной активности препарата Нафтадерм в эксперименте. Альманах Ретиноиды. 2003;15:51-59.
    Яцковский А.Н., Белоусова Т.А., Ноздрин В.И.

Все материалы