М.Г. Костяева1, О.А. Дольникова2,3, С.Ю. Петрова4,5, К.В. Ноздрин4, О.Р. Зиганшин2,3
1 – Российский университет дружбы народов им. Патриса Лумумбы, Москва, Россия;
2 – ГБУЗ Челябинский областной клинический кожновенерологический диспансер, Челябинск, Россия;
3 – ФГБОУ ВО «Южно-Уральский государственный медицинский университет», Челябинск, Россия;
4 – АО «Ретиноиды», Балашиха, Россия;
5 – Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток имени И.И. Мечникова, Москва, Россия;
Обоснование: Наиболее часто для профилактики старения кожи используют натуральную форму витамина А (ретинола пальмитат). На российском рынке существует два топических препарата, которые содержат высокую концентрацию ретинола пальмитата (РП). Это – мазь «Видестим», где содержится 0,5% РП и мазь «Радевит Актив», в состав которой помимо 1% РП входят ещё колекальциферол (0,005%) и токоферола ацетат (0,5%). Особенности воздействия высоких концентраций ретинола пальмитата на структуру стареющей кожи ещё не полностью изучены.
Цель исследования: Сравнительная гистологическая оценка воздействия мази «Видестим» и мази «РадевитАктив» на эпидермис и дерму женщин 40-55 лет.
Методы: В клиническое исследование были включены 18 пациенток в возрасте от 40 до 55 лет. В I группу вошли 6 женщин, которым наносили мазь «Видестим» 2 раза в день на кожу лица. II группа состояла из 6 женщин, которым наносили мазь «РадевитАктив» 2 раза в день на кожу лица. III группа – из 6 женщин и была интактной группой сравнения. Срок наблюдения составлял 90 дней. Пациентам до и через 90 дней после применения вышеуказанных средств проводили пункционную биопсию, гистологические и морфометрические исследования кожи.
Результаты: По результатам исследования выявлено, что мази «Видестим» и «РадевитАктив» оказывают стимулирующее воздействие на пролиферацию кератиноцитов эпидермиса, что проявлялось в увеличении количества слоев клеток. Кроме того, под действием данных препаратов повышается синтетическая активность кератиноцитов зернистого слоя, и формируется компактный роговой слой эпидермиса. Применение мазей приводит к достоверному увеличению толщины, как эпидермиса, так и дермы.
Заключение: Мази с высокой концентрацией ретинола пальмитата улучшают структуру стареющей кожи.
Ключевые слова: гистологическое исследование кожи; старение кожи; мази с ретинола пальмитатом; колекальциферол; токоферола ацетат.
Старение – генетически детерминированный, неизбежный процесс снижения функциональной активности органов и тканей [1]. Видимое хронологическое старение кожи наступает возрасте около 28–30 лет. Это обусловлено прежде всего снижением регенераторных и пролиферативных процессов, а также уменьшением синтетической активности клеток эпидермиса и дермы, сопровождающихся общими гормональными изменениями в организме [2].
Старение кожи характеризуется в 10–50% случаев истончением эпидермиса, сухостью, очаговыми гиперкератозами, образованием мелких морщин и потерей эластичности [3]. Но помимо естественного (хронологического) старения, свойственного всему организму в целом, кожа как защитный орган, активно подвергается фотостарению. Под фотостарением следует понимать изменения кожи, происходящие под воздействием факторов окружающей среды и прежде всего солнечного излучения (УФ-лучи, видимый спектр и инфракрасное излучение) [4]. Типичные признаки фотостарения сильно зависят от фототипа кожи и фенотипически могут проявляться очаговой гипер- и гипопигментацией, лентиго, актиническим кератозом, грубыми морщинами, ростом риска злокачественных новообразований [2, 4]. Всего выделяют 6 фототипов кожи. Из них первые три наиболее подвержены фотостарению [5].
Зрелая кожа характеризуется снижением синтеза ряда компонентов (филлагрина, аквапоринов, элеидина) и митотической активности кератиноцитов эпидермиса, нарушением процесса салообразования в дерме [6]. Указанное выше, приводит к снижению гидратации и проницаемости рогового слоя эпидермиса и повышению его pH, что проявляется возрастной сухостью кожи и её повышенной склонностью к инфицированию. В дерме также снижается синтез гликозаминогликанов, коллагена, эластина [6, 7]. Морфологические признаки старения кожи можно увидеть при гистологическом исследовании. В исследованиях было отмечено истончение эпидермиса, утрата компактности рогового слоя, очаговые гиперкератозы [6, 8]. В дерме также происходят изменения, дермо-эпидермальная граница становится ровной (сглаживаются дермальные сосочки). Избыточный, нерегулируемый ангиогенез приводит к образованию телеагиэктазии [8].
Наиболее часто для профилактики старения кожи используют натуральную форму витамина А (ретинола пальмитат), так как он обладает не только достаточно многогранным спектром устранения проблем в стареющей коже, но и не имеет серьёзных местных побочных эффектов, свойственных другим ретиноидам [9, 10].
На российском рынке существует два препарата, которые содержат высокую концентрацию ретинола пальмитата (РП). Это – мазь «Видестим», где содержится 0,5% РП и мазь «РадевитАктив», в состав которой помимо 1% РП входят ещё колекальциферол (0,005%) и токоферола ацетат (0,5%). Особенности воздействия высоких концентраций РП на структуру стареющей кожи ещё не полностью изучены. Были проведены многочисленные гистологические исследования по влиянию вышеперечисленных препаратов на кожу экспериментальных животных. Гистологических исследований по влиянию данных препаратов на кожу человека не проводили [11].
Цель исследования: Сравнительная гистологическая оценка воздействия мази «Видестим» и мази «РадевитАктив» на эпидермис и дерму женщин 40–55 лет.
Дизайн исследования
В сравнительное проспективное клиническое исследование включены 18 пациенток в возрасте от 40 до 55 лет без сопутствующих кожных заболеваний.
Критерии соответствия
Критерии включения: женщины с признаками возрастных изменений кожи в возрастном интервале 40–55 лет; 2,3 фототип; отсутствие профессиональных косметологических процедур в анамнезе; отсутствие острых заболеваний и обострения хронической соматической патологии; информированное согласие пациента на участие в исследовании; отсутствие на момент исследования системного приёма высоких доз витамина А, глюкокортикостероидов и цитостатиков, а также витаминов D3 и Е.
Критерии исключения: аллергические реакций или индивидуальная непереносимость к компонентам препаратов в анамнезе и в процессе исследования; участие в другом клиническом исследовании в период проведения данного исследования; беременность; любые виды острых и хронических заболеваний.
Условия проведения
Исследование проводили на базе Челябинского областного клинического кожновенерологического диспансера (Челябинск, Россия) в зимний период (вне интенсивной солнечной инсоляции).
Описание медицинского вмешательства
Пациентки были разделены на три группы. В I группу вошли 6 женщин, которым наносили мазь «Видестим» 2 раза в день на кожу лица. II группа состояла из 6 женщин, которым наносили мазь «РадевитАктив» 2 раза в день на кожу лица, III группа была из 6 женщин и составляла интактную группу сравнения. В данной группе предусмотрено отсутствие профессионального ухода за кожей лица (отказ от систематического применения наружных увлажняющих и смягчающих кремов и мазей с активными веществами) в течение всего периода наблюдения. Пациенткам было рекомендовано использовать при нанесении правило «Единицы кончика пальца» (ЕКП). Это то количество мази или крема, которое помещается на самой дальней от ладони фаланге указательного пальца. Если тюбик имеет отверстие диаметром 5 мм, то ЕКП равен примерно 0,5 грамм [12].
Исходы исследования
Основной исход исследования: Пациентам до и через 90 дней после применения вышеуказанных средств проводили гистологическое исследование кожи.
Дополнительные исходы исследования: Морфометрические исследования кожи. Методы регистрации исходов.
Проводили пункционную биопсию (punch-биопсию) с последующим гистологическим исследованием [13]. Использовали фрагмент кожи правой передней околоушной области. Полученные биоптаты фиксировали в 10% раствор формалина. Окраску препаратов проводили гематоксилином и эозином и по методу Маллори. Фиксацию, приготовление и окрашивание препаратов проводили согласно классическим методикам [14]. Гистологические и морфометрические исследования проводили с использованием микроскопов Primo Star и Axioskop 2 (Zeiss, Германия) с окуляр-микрометром Carl Zeiss (Zeiss, Германия). Для управления камерой микроскопа и обработки изображений использовали программу ToupView (Windows). В каждом образце делали 20 измерений эпидермиса и 10 измерений дермы. Затем рассчитывали среднее значение. Эпидермис измеряли от рогового слоя до базальной мембраны, исключая места с воронкой волосяного фолликула.
На заседании локального этического комитета ГБУЗ «ЧОККВД» постановили «одобрить проведение клинического исследования на тему «эффекты топических препаратов с ретинола пальмитатом направленные на профилактику старения кожи» без замечаний» в которое вошло и гистологическое исследование согласно протоколу клинического исследования. Протокол локального этического комитета ГБУЗ «ЧОККВД» №1 от 12.01.2023.
Статистический анализ
Принципы расчета размера выборки: В связи с тем, что punch-биопсия инвазивная методика, было решено ограничиться минимальной статистической выборкой пациентов.
Методы статистического анализа данных: Результаты обрабатывали с помощью пакета прикладных статистических программ «Microsoft Excel» версия 2010. Для оценки статистической значимости различий в группах вычисляли следующие величины: выборочное среднее (x), разность выборочных средних (x2-x1), стандартную ошибку разности выборочных средних (sразность) и 95% доверительный интервал (95% ДИ) для разности средних. Критической величиной уровня значимости считали α=0,05 [15].
Характеристика эпидермиса и дермы у женщин 40-55 лет до начала исследования 3 группа (группа сравнения) (n=6).
Эпидермис
Толщина эпидермиса в образцах данной группы варьировала от 50 мкм до 60 мкм. Поверхность эпидермиса во всех образцах биоптатов кожи не имела выростов, струпов, дефектов. Количество эпителиоцитов шиповатого слоя варьировало от 2 до 3 рядов клеток. Форма базальных кератиноцитов чаще кубическая, ядра клеток гиперхромные. Акантоз и акантолиз отсутствовали. Фигуры митоза (метафазные пластинки) в среднем, встречались 1–2 на 3 исследуемых поля зрения (10х40). Количество рядов клеток зернистого слоя не превышало 1. Роговой слой во всех образцах был в среднем 8–10 мкм, рыхлый, неплотно прилегающий к поверхности. Паракератоз и дискератоз отсутствовали во всех образцах. Дермоэпидермальное соединение четкое, отслойка клеточного пласта от базальной мембраны не наблюдалась. Внутриэпидермальные лейкоциты, некрозы, дистрофические изменения эпителиоцитов отсутствовали во всех образцах.
Дерма
Толщина дермы в контрольной группе варьировала от 640 до 700 мкм. Сосочковый слой дермы был хорошо выражен, клеточный состав был представлен характерными клетками: фибробластами, макрофагами и др. В сетчатом слое дермы оценивали характер, расположение, толщину соединительнотканных волокон. Волокна были умеренно развиты, разрозненные. Отек, инфильтрации во всех образцах этой группы отсутствовали. Волосяные фолликулы располагались разрозненно. Корневые влагалища, волосяные луковицы не имели патоморфологических изменений. Сальные железы были ассоциированы с волосяными фолликулами. Количество профилей в поле зрения 10х10 от 4 до 7. Форма базальных себоцитов чаще была призматической. Потовые железы располагались глубоко в сетчатом слое дермы, формировали группы. Сосуды дермы были не кровенаполнены, без признвков диапедеза, кровоизлияний.
Гиподерма в двух образцах из шести отсутствовала. Имела организацию в виде долек, ограниченных соединительной тканью, хорошо васкуляризирована.
Группа № 3 (через 90 дней после отсутствия применения косметических средств) (n=6).
В образцах третьей группы, которые забирались через 90 дней после отсутствия применения косметических средств эпидермис и дерма практически не имели изменений. Толщина эпидермиса была от 50 до 65 мкм. В эпидермисе был толще роговой слой, наблюдались признаки очагового гиперкератоза, фигуры митоза в ростковом слое встречались реже (0-1 на 3 поля зрения 10х40). Эпителиоциты зернистого слоя уплощенные с низким содержанием кератогиалиновых гранул в цитоплазме. Толщина дермы практически не менялась, однако профили сальных желез были меньше (визуально). Патоморфологические изменения отсутствовали.
Группа № 1 (до применения мази с 0,5% РП – «Видестим») и группа № 2 (до применения мази с 1% РП, 0,005% колекальциферолом, 0,5% токоферола ацетатом - «РадевитАктив»). В каждой группе исследовано по 6 образцов биоптатов кожи лица.
Характеристика эпидермиса и дермы в образцах до применения мазей в 1 и 2 группах была схожа с образцами первой контрольной группы (Рисунок 1.1., Рисунок 1.4.).
Рисунок 1. Гистологический препараты окраска гематоксилином и эозином
1 – препарат №7 увеличение 10х10; 2 – препарат №7 увеличение 10х20. Можно увидеть плотное прилегание чешуек рогового слоя (чёрные стрелки); 3 – препарат №7 увеличение 10х40. Можно увидеть, что кератиноциты зернистого слоя содержат обильные кератогиалиновые гранулы (чёрные стрелки); 4 – препарат №10 увеличение 10х20. Можно увидеть складчатую поверхность кожи (белые стрелки); 5 – препарат №10 увеличение 10х20. На препарате хорошо видно увеличение рядов кератиноцитов (черная стрелка), рельеф поверхности кожи более ровный (белая стрелка). 6 – препарат № 14 увеличение 10х80. Эпидермис содержит до 15 рядов кератиноцитов (черная стелка), зернистый слой хорошо выражен (белые стрелки).
Характеристика эпидермиса и дермы у женщин 40–55 лет в группе № 1 (через 90 дней после применения мази с 0,5% РП – «Видестим») (n=6).
Эпидермис
Толщина эпидермиса в образцах данной группы изменилась, варьировала от 70 мкм до 80 мкм. Отмечены статистически значимые отличия по увеличению толщины эпидермиса между данной группой и группой сравнения (p<0,05) (Таблица 1). Количество эпителиоцитов шиповатого слоя варьировало от 3 до 5 рядов клеток. Форма базальных кератиноцитов чаще призматическая, ядра клеток гиперхромные. Фигуры митоза (метафазные пластинки) встречались (3–5 на 3 исследуемых поля зрения 10х40). Зернистый слой был хорошо выражен, до 2-х рядов кератиноцитов с крупными многочисленными гранулами. Роговой слой был тоньше после применения мази (2–4 мкм). Дермоэпидермальное соединение четкое, отслойка клеточного пласта от базальной мембраны не наблюдалась. Визуально рельеф эпидермиса и дермы стал более ровным (Рисунок 1.2., Рисунок 1.3.).
Дерма
Толщина дермы была от 750–850 мкм. Однако отмечены статистически значимые отличия по увеличению толщины дермы между данной группой и группой сравнения (p<0,05). (Таблица 1). Все производные имели ту же гистологическую характеристику, что и в образцах до применения мази с 0,5% РП. Гиподерма присутствовала в 4 образцах из шести.
Характеристика эпидермиса и дермы у женщин 40–55 лет в группе № 2 (после применения мази с 1% РП, 0,005% колекальциферолом, 0,5% токоферола ацетатом –«РадевитАктив») (n=6).
Эпидермис
Толщина эпидермиса варьировала от 75 до 90 мкм. Отмечены статистически значимые отличия по увеличению толщины эпидермиса между этой группой и группой сравнения (p<0,05). При этом статистически значимых отличий по увеличению толщины эпидермиса между данной группой и группой женщин, получавших мазь Видестим, не выявлено (p> 0,05). Роговой стал истонченным (Таблица 1). Эпителий стал толще за счет увеличения количества рядов эпителиоцитов шиповатого слоя (до 5–7 рядов). Фигуры митоза в ростковом слое встречались (3–6 на 3 поля зрения 10х40). Клетки зернистого слоя были полигональной формы, с крупными многочисленными кератогиалиновыми гранулами и составляли 1–2 ряда. В образце № 14 отсутствовал гиперкератоз после 90-дневного применения мази «РадевитАктив» (Рисунок 1.5., Рисунок 1.6.).
Дерма
Толщина дермы в этой группе варьировала от 800 до 850 мкм (и более, т.к. в некоторых образцах отсутствовала гиподерма и нижняя граница не определялась). Отмечены статистически значимые отличия по увеличению толщины дермы между данной группой и группой сравнения (p<0,05). При этом статистически значимых отличий по увеличению толщины дермы между данной группой и группой женщин, получавших мазь с 0,5% РП, не выявлено (p>0,05). (Таблица 1). Сосочковый слой дермы был хорошо выражен, хорошо васкуляризирован, в сетчатом слое дермы волокна были упакованы плотнее, чем до лечения, но не толще (новообразованные волокна коллагена 1 типа тоньше образованных ранее). Лейкоциты в дерме во всех образцах этой группы отсутствовали. Производные кожи: волосяные фолликулы, сальные и потовые железы не имели патоморфологических изменений. Изменился рельеф эпидермиса и дермы, в образцах № 10 и 27, показанных до применения мази «РадевитАктив» и после применения (Рисунок 1.5.) инвагинации (возможно мелкие морщины) отсутствовали.
Нежелательные явления
Нежелательных явлений за всё время применения данных препаратов у пациенток отмечено не было.
| Группы | выборочная средняя до (мкм) | выборочная средняя после (мкм) | Разность выборочных средних (мкм) | Стандартная ошибка разности выборочных средних | 95% ДИ для разности средних (мкм) | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| x1 | x2 | x2-x1 | Sразность | от | до | |
| Эпидермис | ||||||
| 1 группа (n=6) | 59,4 | 72,13 | 12,73 | 2,23 | 7,76 | 17,7 |
| 2 группа (n=6) | 63,43 | 78,77 | 15,33 | 2,39 | 10,01 | 20,65 |
| 3 группа (n=6) | 57,63 | 60,92 | 3,28 | 1,95 | -1,07 | 7,63 |
| Дерма | ||||||
| 1 группа (n=6) | 706,75 | 807,7 | 100,95 | 17,39 | 62,21 | 139,69 |
| 2 группа (n=6) | 663,25 | 802 | 138,75 | 15,62 | 103,95 | 173,55 |
| 3 группа (n=6) | 616,88 | 615,82 | -1,07 | 21,58 | -49,15 | 47,02 |
степень свободы - 10. t0,05=2,228. 1 группа – мазь с 0,5% РП («Видестим»); 2 группа – мазь с 1% РП, 0,005% колекальциферолом и 0,5% токоферола ацетатом («РадевитАктив»); 3 группа – группа сравнения.
Резюме основного результата исследования
По результатам проведенного гистологического исследования можно сделать следующие выводы.
Через 90 дней после применения мази «Видестим» заметно улучшилось общее состояние кожи: повысилось количество митозов в шиповатом слое, количество кератогиалиновых гранул в зернистом слое.
Во второй группе, где исследовали воздействие мази «РадевитАктив» изменения по сравнению с образцами, взятыми до применения мази были еще более заметными, чем в первой группе. Через 90 дней после применения данного препарата статистически значимо увеличилась толщина эпидермиса (по сравнению с группой женщин, не получавших ухода за кожей), в основном за счет шиповатого слоя. Более выраженным стал зернистый слой. При этом роговой слой стал тоньше, прилежал к общему пласту плотнее.
В обеих группах статистически значимо увеличилась (по сравнению с группой женщин, не получавших ухода за кожей) толщина эпидермиса и дермы.
Обсуждение основного результата исследования
Таким образом мази с 0,5% и 1% РП оказывают стимулирующее воздействие на пролиферацию клеток кожи, о чем можно судить по увеличению фигур митозов в базальном слое эпидермиса, способствуют увеличению кератогиалиновых гранул в зернистом слое эпидермиса. Последнее свидетельствует об улучшении организации рогового слоя эпидермиса, а соответственно и его барьерной функции, и увлажнения [11]. Поскольку толщина дермы косвенно зависит от продукции фибробластами межклеточного матрикса (гликозаминогликанов, коллагена и эластина), и известно, что с возрастом дерма истончается, то можно предполагать об оптимизации данными мазями структуры дермы и их способности в итоге увеличивать упругость кожи и разглаживать морщины [16, 17]. Этот вывод подтверждает и видимое на препаратах в группе женщин, применявших мазь «РадевитАктив», уплотнение коллагеновых волокон в сетчатом слое дермы. Увеличение количества сосудов в сосочковом слое дермы, появившееся при использовании данной мази, свидетельствует об усилении питания как эпидермиса, так и дермы.
Ограничения исследования
Возможно, мы бы смогли увидеть статистически значимые отличия по воздействию мазей «Видестм» и «РадевитАктив» на толщину эпидермиса и дермы, но выборка была мала.
Мази с высокой концентрацией ретинола пальмитата улучшают структуру стареющей кожи.
Все авторы несут ответственность за содержание и целостность всей статьи.
Вклад авторов: концепция и дизайн исследования – С.Ю. Петрова, О.А. Дольникова, К.В. Ноздрин; сбор и обработка материала – М.Г. Костяева, О.А. Дольникова; написание текста – М.Г. Костяева, С.Ю. Петрова; редактирование – М.Г. Костяева, К.В. Ноздрин, О.Р. Зиганшин.
С.Ю. Петрова официально работает в АО «Ретиноиды» и является консультантом/лектором/участником клинических исследований и мероприятий, спонсируемых АО «Ретиноиды». К.В. Ноздрин является директором АО «Ретиноиды».
Не забудьте вступить в наши группы в социальных сетях!