В.И. Ноздрин, А.Н. Яцковский, Т.А. Белоусова, К.С. Гузев – ЗАО «Ретиноиды», Москва, Россия;

Острая токсичность

Для определения параметров острой токсичности исследуемой мази использовали крыс популяции Вистар и аутбредных мышей обоего пола. Препарат Стизамет^® наносили на выстриженный участок кожи межлопаточной области спины однократно в дозе 2,0 г, что соответствовало 364 мг метилурацила (МУ) на кг массы тела. После нанесения препарата животных в течение 2 часов выдерживали в индивидуальных клетках. О токсичности препарата судили по 15-дневной выживаемости. Все животные дожили до конца эксперимента, что свидетельствует об отсутствии острой токсичности у препарата Стизамет^®.

Подострая и хроническая токсичность

Для изучения подострой и хронической токсичности препарата Стизамет^® использовали крыс популяции Вистар в возрасте 1,5-2 месяцев. Изучение подострой и хронической токсичности проводили на 6 группах крыс по 8–10 животных в каждой. Основные группы животных: 1-я – интактный контроль (животные без мазевых аппликаций ежедневно высаживались на 1 час в индивидуальные зажимные клетки); 2-я – водоэмульсионная основа (ВЭО); 3-я – мазь с 0,5 % содержанием МУ на ВЭО; 4-я – препарат Стизамет^®; 5-я – мазь с 10 % содержанием МУ на ВЭО; 6-я – мазь с 10 % содержанием МУ на ланолин-вазелиновой основе (ЛВО), аналог испытываемого препарата. Препарат наносили на кожу корневой части хвоста (2 см2) ежедневно 5 раз в неделю в течение 1 месяца при исследовании подострой токсичности и в течение 6 месяцев при изучении хронической токсичности. Оценку токсического эффекта проводили по динамике изменения средней массы животных и потребления ими корма, клеточному составу крови и её биохимическим показателям, характеризующим состояние белкового, углеводного, липидного и минерального обмена веществ, по функциональному состоянию печени и почек, абсолютной и относительной массе внутренних органов, их гистоструктуре и морфометрическим показателям.

Подострая токсичность

Анализ результатов исследования подострой токсичности препарата Стизамет^® и мазей, приготовленных на ВЭО и содержащих различные концентрации МУ, выявил ряд эффектов влияния этого вещества на изучавшиеся показатели состояния организма экспериментальных животных. Большинство выявленных эффектов, в частности, увеличение абсолютной массы печени и гипертрофия гепатоцитов, изменение толщины росткового слоя эпидермиса кожи, увеличение площади белой пульпы селезёнки, тенденция к росту числа лейкоцитов в периферической крови, соответствуют известным данным об адаптогенном действии МУ и его стимулирующем влиянии на процессы пролиферации, роста и белкового синтеза [1–8]. Вместе с тем, обнаружены сдвиги, которые частично могут рассматриваться как следствие отрицательного воздействия МУ на организм (снижение абсолютной массы тела животных и снижение показателей потребления ими корма в сравнении с интактными крысами, рост в периферической крови биохимических параметров системы детоксикации). Однако принципиальным является то, что эти эффекты проявляют отчётливую зависимость от дозы субстанции и значимо выражены лишь после аппликаций мази на ВЭО, содержащей 10 % МУ.

Хроническая токсичность

Результаты проведённого исследования свидетельствуют, что длительное, в течение 6 месяцев, применение препарата Стизамет^® и других мазей с МУ может вызывать дозозависимые изменения некоторых показателей состояния организма животных. Так, в течение примерно первых трёх месяцев эксперимента имеет место снижение среднего потребления корма, причём по мере увеличения срока наблюдения проявляется дозозависимый характер этого эффекта. В конце опыта отклонения данного показателя от группы интактных животных отмечены лишь после аппликаций мазей, содержащих 10 % МУ. Среднее потребление корма животными основной испытуемой группы (препарат Стизамет^®) не отличается значимо от величины абсолютного показателя у интактных крыс. Последнее позволяет допустить, что реакция животных на введение в организм МУ в виде дозозависимого снижения объёма потребляемого корма, наблюдаемая в течение первых трёх месяцев эксперимента, в более поздние сроки сменяется адаптацией организма к имевшему место воздействию препаратов. Анализ периферической крови животных, получавших в течение месяца накожные аппликации препарата Стизамет^®, позволяет сделать вывод об отсутствии у него выраженного влияния на количество эритроцитов и лейкоцитов, а также на большинство биохимических показателей сыворотки крови.

Морфометрический анализ толщины росткового слоя эпидермиса в зоне аппликаций выявил статистически значимое уменьшение величины данного показателя в группе животных, получавших накожные аппликации препарата Стизамет^® и мазей, содержащих 10 % МУ. Можно полагать, что длительное применение МУ в составе вышеназванных мазей в результате своего специфического стимулирующего эффекта на клеточную пролиферацию ведёт к истощению популяции стволовых клеток эпителия кожи и как следствие – к уменьшению толщины его ростковой зоны.

Таким образом, обнаруженные изменения носят преимущественно характер реактивных и не отражают цитопатогенного воздействия препарата Стизамет^® и исследованных мазей, содержащих МУ.

Местно-раздражающее действие

Оценку местно-раздражающего действия препарата Стизамет^® проводили в сравнении с препаратом мазь метилурациловая 10 %, приготовленная на ЛВО. Для этих целей использовали пятнистых морских свинок массой 300–350 г. На боковой поверхности туловища животных выстригали волосяной покров площадью 4х4 см, на этот участок ежедневно в течение 14 дней наносили исследуемые препараты в количестве 0,2 г. В качестве контрольных групп использовали интактных животных и свинок, получавших ВЭО или ЛВО. В обеих экспериментальных группах исследовано по 8 животных, в контрольных группах – по 6 морских свинок. Возможное местно-раздражающее действие препаратов оценивали в условных баллах по гиперемии сосудов и наличию отёка соединительной ткани дермы, по наличию скоплений эозинофилов и тучных клеток в дерме, а также нейтрофильных и мононуклеарных лейкоцитов в эпидермисе и дерме.

Установлено, что длительное накожное нанесение препаратов, содержащих разные концентрации МУ и приготовленных на различных мазевых основах, сопровождается незначительным расширением сосудов микроциркуляторного русла сосочкового слоя дермы. Немногочисленные периваскулярные скопления мононуклеарных клеток обнаружены не только у экспериментальных, но и у контрольных животных. Небольшая инфильтрация дермы мононуклеарными лейкоцитами, отмеченная после аппликаций метилурациловой мази 10 % на ЛВО, скорее всего, является реакцией клеточных структур на длительное воздействие основы, нежели эффектом содержащейся в препарате субстанции. Полученные результаты исследования местно-раздражающего действия препарата Стизамет^® свидетельствуют об отсутствии такового.

Аллергизирующие свойства

Оценку аллергизирующего действия препарата Стизамет^® проводили в сравнении с препаратом мазь метилурациловая 10 %, приготовленной на ЛВО, и интактными животными. В исследованиях использовали беспородных морских свинок-самок альбиносов массой 300–350 г. На боковой поверхности туловища животных выстригали волосяной покров на участке площадью 4х4 см. На этот участок кожи наносили 0,5 г исследуемых препаратов, после чего животных помещали на 4 часа в индивидуальные клетки для предотвращения слизывания препарата. Аппликацию мазей проводили через день в течение 10 дней – всего 5 аппликаций. Сенсибилизацию животных выявляли через 5 дней после окончания нанесения препаратов. С этой целью на кожу уха однократно наносили 0,3 г мази в разрешающей дозе (концентрация МУ 0,3 %). Местную аллергическую реакцию учитывали через 6, 12 и 24 часа. Интенсивность реакции оценивали по наличию и величине отёка уха. Измерение толщины уха проводили с помощью микрометра. У всех исследованных животных получен отрицательный результат.

Таким образом, препарат Стизамет^®, содержащий метилурацил в концентрации 3 % и приготовленный на водоэмульсионной основе, в данных условиях эксперимента не обладает аллергизирующим действием.

Литература

1. Билич Г.Л. Стимуляция регенерационных и защитных механизмов в детской хирургии. – М.: Медицина, 1976. – 223 с.
2. Брауде А.И., Смертенко И.И., Щербакова Э.Г. Экспериментально-цитологическое изучение стимулирующего влияния 1,8-меркаптоаденина и 4-метилурацила на клеточный метаболизм // Матер. конф. Применение пиримидиновых и пуриновых производных в хирургии и смежных областях медицины. – Ростов н/Д, 1970. – С. 41–48.
3. Винницкий Л.И., Жидков И.Л., Тебенкова В.Ф. Воздействие метилурацилом на печёночную и мышечную ткань крыс в условиях адреналэктомии // Матер. Всесоюз. симп. Регуляция воспаления и регенерации в хирургии. – Ростов н/Д, 1976. –С. 110–112.
4. Волощенко О.И. К механизму действия метилурацила // Матер. конф. Фармакологическая регуляция регенераторных процессов. – Йошкар-Ола, 1979. – С. 68–69.
5. Машковский М.Д. Лекарственные средства (пособие для врачей). Ч.II // М., 1996. – С.161–163.
6. Омельянчик М.С., Макшанова Е.И. Биогенные амины: метаболические эффекты метилурацила // Матер. конф. Актуальные вопросы разработки, изучения и производства лекарственных средств. – Каунас, 1985. – С. 277–278.
7. Попова О.И. Влияние 6-метилурацила на обмен свободных нуклеотидов в нормальной и регенерирующей печени крыс (экспериментальное исследование): Автореф. дис. канд. биол. наук. – М., 1980. – 22 с.
8. Русаков В.И., Волощенко О.И. О влиянии 4-метилурацила на некоторые показатели функционального состояния коры надпочечников // Клин. хир. – 1976. – №6. – С. 51–53.